(1)人自身免疫调节因子(AIRE)检测试剂盒包被液的选择:一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下最终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
(2)人自身免疫调节因子(AIRE)检测试剂盒封闭:继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。但最终选用什么,要依据试验具体来实践。
(3)人自身免疫调节因子(AIRE)检测试剂盒洗涤板:可以说在ELISA操作中,洗涤是最主要的关键技术。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的,清除残留在板孔中游离的物质,以及非特异性地吸附的干扰物质,在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。所以在洗板时会有一定误差,人为因素很大(当然有条件的用洗板机除外),洗的不彻底或串了孔,对如此灵敏的ELISA系统可是不小的影响。
(4)加抗体标本(和二抗):注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用PBS稀释,也可用封闭液去稀释。如需加二抗,还要注意二抗的工作浓度,太高浪费,太低则着色浅。
(5)人自身免疫调节因子(AIRE)检测试剂盒显色:显色系统又很多,我们一开始做的时候,要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠。
每次做尽量要把阴阳空三个对照做好,如出现问题也好分析。
HZB309Mu 小鼠多效生长因子(PTN)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Pleiotrophin (PTN)
HZB559Mu 小鼠丝切蛋白1(CFL1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Cofilin 1, Non Muscle (CFL1)
HZB570Mu 小鼠粒细胞趋化蛋白2(GCP2)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Granulocyte Chemotactic Protein 2 (GCP2)
HZB575Mu 小鼠二级淋巴组织趋化因子(SLC)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Secondary Lymphoid Tissue Chemokine (SLC)
HZB601Mu 小鼠B-淋巴细胞趋化因子1(BLC1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for B-Lymphocyte Chemoattractant 1 (BLC1)
HZB689Mu 小鼠白介素28A(IL28A)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Interleukin 28A (IL28A)
HZB700Mu 小鼠白介素17B(IL17B)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Interleukin 17B (IL17B)
HZB882Mu 小鼠成纤维细胞生长因子10(FGF10)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 10 (FGF10)
HZB945Mu 小鼠表皮调节素(EREG)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Epiregulin (EREG)
HZB534Mu 小鼠趋化因子C-C-基元受体1(CCR1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Chemokine C-C-Motif Receptor 1 (CCR1)
HZC044Mu 小鼠肝X受体α(LXRα)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Liver X Receptor Alpha (LXRa)
HZC907Mu 小鼠成纤维细胞生长因子18(FGF18)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 18 (FGF18)
HZB955Mu 小鼠白介素17F(IL17F)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Interleukin 17F (IL17F)
HZC906Mu 小鼠成纤维细胞生长因子3(FGF3)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Fibroblast Growth Factor 3 (FGF3)
HZC513Mu 小鼠颗粒体蛋白(GRN)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Granulin (GRN)
HZC389Mu 小鼠心营养素样细胞因子1(CLCF1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Cardiotrophin Like Cytokine Factor 1 (CLCF1)
HZC175Mu 小鼠左右决定因子1(LEFTY1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Left/Right Determination Factor 1 (LEFTY1)
HZC125Mu 小鼠Cerberus蛋白(CER)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Cerberus (CER)
HZC110Mu 小鼠生长分化因子5(GDF5)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Growth Differentiation Factor 5 (GDF5)
HZC108Mu 小鼠生长分化因子1(GDF1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Growth Differentiation Factor 1 (GDF1)
HZC071Mu 小鼠干扰素诱导T-细胞α亚族趋化剂(ITαC)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Interferon Inducible T-Cell Alpha Chemoattractant (ITaC)
HZC068Mu 小鼠VEGF共调节趋化因子1(VCC1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1)
HZF323Mu 人自身免疫调节因子(AIRE)检测试剂盒小鼠羧肽酶N1(CPN1)检测试剂盒规格 ELISA Kit for Carboxypeptidase N1 (CPN1)
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