温育是小鼠多效生长因子(PTN)检测试剂盒测定中影响测定成败最为关键的一个因素。小鼠多效生长因子(PTN)检测试剂盒作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。
温育这一步是临床小鼠多效生长因子(PTN)检测试剂盒测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:
(1)要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,小鼠多效生长因子(PTN)检测试剂盒临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
(2)温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中,指出温育温度可有两种,例如,一种是37℃下1小时,另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看,在较低的温度下反应较长的时间最为完全。如2~8℃下反应24小时。较高的反应温度,由于分子运动的加怜惜,反应时间缩短,这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题,但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此,我们建议在临床小鼠多效生长因子(PTN)检测试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。
(3)“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中,常发现有“边缘效应”,即外周孔显色较中心孔深,产生这种“边缘效应”的原因可能为 96孔板周孔与中心孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规 ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很容易地排除“边缘效应”,并且可提高测定的重复性。
总而言之,在临床小鼠多效生长因子(PTN)检测试剂盒测定中,要保证好的测定效果,可采用下述简单办法来确保温育条件,即尽量采用水浴,温育中让微孔板浮于水面上,或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒,放于温箱中,这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触,以及水浴箱或湿盒内的高温度,而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。
hzH178Hu 人N-磺氨基葡糖磺基氢化酶(SGSH)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for N-Sulfoglucosamine Sulfohydrolase (SGSH)
hzH234Hu 人核黄素激酶(RFK)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Riboflavin Kinase (RFK)
hzH244Hu 人网钙蛋白2(RCN2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Reticulocalbin 2 (RCN2)
hzH366Hu 人丝束蛋白1(PLS1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Plastin 1 (PLS1)
hzH428Hu 人异戊烯半胱氨酸氧化酶1(PCYOX1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Prenylcysteine Oxidase 1 (PCYOX1)
hzH578Hu 人NAD激酶(NADK)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for NAD Kinase (NADK)
hzH582Hu 人肌原调节蛋白2(MYOZ2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Myozenin 2 (MYOZ2)
hzH585Hu 人肌间蛋白2(MYOM2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Myomesin 2 (MYOM2)
hzH590Hu 人生肌因子5(MYF5)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Myogenic Factor 5 (MYF5)
hzH609Hu 人亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Methylenetetrahydrofolate Reductase (MTHFR)
hzH673Hu 人苹果酸脱氢酶1(MDH1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Malate Dehydrogenase 1 (MDH1)
hzH755Hu 人犬尿氨酸-3-单加氧酶(KMO)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Kynurenine-3-Monooxygenase (KMO)
hzH816Hu 人白介素4诱导蛋白1(IL4I1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Interleukin 4 InduHZd Protein 1 (IL4I1)
hzH884Hu 人Hornerin蛋白(HRNR)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Hornerin (HRNR)
hzH917Hu 人造血蛋白(HEMGN)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Hemogen (HEMGN)
hzH918Hu 人Hephaestin蛋白(HEPH)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Hephaestin (HEPH)
hzJ094Hu 人果糖胺-3-激酶(FN3K)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Fructosamine-3-Kinase (FN3K)
hzJ105Hu 人Fission 1蛋白(FIS1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Fission 1 (FIS1)
hzJ280Hu 人D-天冬氨酸氧化酶(DDO)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for D-Aspartate Oxidase (DDO)
hzJ314Hu 人二-N-乙酰壳二糖酶(CTBS)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Di-N-AHZtyl Chitobiase (CTBS)
hzJ323Hu 人半胱氨酸蛋白酶抑制剂2(CST2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Cystatin 2 (CST2)
hzJ332Hu 人酪蛋白β(CSN2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Casein Beta (CSN2)
hzJ341Hu 人Cornulin蛋白(CRNN)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Cornulin (CRNN)
hzJ355Hu 人冠蛋白1A(CORO1A)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Coronin 1A (CORO1A)
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hzJ554Hu 人桥连整合因子2(BIN2)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Bridging Integrator 2 (BIN2)
hzJ555Hu 人桥连整合因子1(BIN1)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Bridging Integrator 1 (BIN1)
hzJ596Hu 人Artemin蛋白(ARTN)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Artemin (ARTN)
hzJ640Hu 人苯胺素(ANLN)检测试剂盒说明书 ELISA Kit for Anillin (ANLN)
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