人垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒

人垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒中加样须注意如下问题：

1. 吸取样品时，加样枪吸头不应黏附多余的液体；加样时不可90度向孔中滴加液体，这样会导致液体残留在吸头上，加样不准确！

2. 不要将吸头伸入孔中，一方面若接触孔底可能压弯吸头，另一方面可能会将孔中的液体吹起来，加样不准确！

正确的加样方法应为45度，吸头贴着孔壁加入，应注意：

1. 角度太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不准确！

2. 吸头应当贴着管壁和液面的交界处！

在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中，如以TMB为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以OPD为底物，则试剂盒提供OPD片剂或粉剂，临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37℃或室温反应15～30分钟。从理论上说，37℃30分钟才可以使HRP的底物催化反应完全，尽管在最初的10分钟内，绝大部份催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37℃下反应25～30分钟后，终止反应比色测定。

此外，人垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒在加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效性，即可将A和B两种液各加一滴于清洁的空板孔或eppendorf管中，观察是否有显色出现，如有，则说明底物已变质。以OPD为底物，配好后应为无色，否则就不能使用。以TMB为底物，整个显色反应过程无需避光，而以OPD为底物，则需避光进行。关于TMB和OPD的显色反应特点及注意点可参考前面有关章节内容。显色反应完成后，加入酸终止反应，振荡混匀后即可进行下面的比色测定或肉眼判断结果。

1.3 正态分布及标准差 ELISA试验中，检验同一样本达20次以上时，就会发现这组数据（指测定结果的吸光值）分布在均值两侧，大部分集中在均值附近。如果以测定值为横坐标，以出现的频率为纵坐标作图，就可绘出一个呈钟形的曲线图。如图5-1，钟顶处为均值，其他值以均值为中心对称分布，这就是正态分布。 正态曲线以下的面积称概率，常用样本的均数（X）和标准差（SD）来表示，人垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒其计算方法如下： 　　 　　均值、标准差和概率的关系如下： 　　X±1SD，概率0.68　　　　X±2SD，概率0.95　　　　X±3SD，概率0.99 换言之，当ELSIA检测同一样本达一定次数后所得的一组数据，其中靠近均值（X）的±1SD范围内的数据，占该组数据的68%，在X±2SD范围内分布的数据占总体的95%，在X±3SD范围内分布的数据占总体的99%。当我们要求检验结果在X±2SD范围内为合格时，将有95%的数据可能合格。

优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条

件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。

本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试

剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出

准确的结果。

人垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒相关产品系列表：

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