在小鼠环氧化合物水解酶4(EPHX4)检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取小鼠环氧化合物水解酶4(EPHX4)检测试剂盒“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
实验原理
小鼠环氧化合物水解酶4(EPHX4)检测试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中
TLR水平。用纯化的抗体包被微孔
板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入
TLR抗原、生物素化的抗人
TLR抗体、HRP
标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TLR呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制
小鼠环氧化合物水解酶4(EPHX4)检测试剂盒相关如下:
ELISA Kit for Interferon Gamma Induced Protein 10kDa (IP10) 小鼠10kDa干扰素γ诱导蛋白(IP10)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Desmin (Des) 小鼠结蛋白(Des)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 1, 小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(ADCYAP1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Epidermal Growth Factor Receptor 2 (EGFR2) 小鼠表皮生长因子受体2(EGFR2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Mucin 5 Subtype B (MUC5B) 小鼠粘蛋白5B(MUC5B)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Interleukin 33 (IL33) 小鼠白介素33(IL33)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Fibrinogen Alpha (FGa) 小鼠纤维蛋白原α(FGα)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Insulin Degrading Enzyme (IDE) 小鼠胰岛素降解酶(IDE)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Toll Like Receptor 4 (TLR4) 小鼠Toll样受体4(TLR4)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Toll Like Receptor 2 (TLR2) 小鼠Toll样受体2(TLR2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Glutathione Peroxidase 1 (GPX1) 小鼠谷胱甘肽过氧化酶1(GPX1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Alkaline Phosphatase, Liver/Bone/Kidney (ALPL) 小鼠肝肾骨碱性磷酸酶(ALPL)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Creatine Kinase MB Isoenzyme (CKMB) 小鼠肌酸激酶MB同工酶(CKMB)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Alpha-1-Antitrypsin (a1AT) 小鼠α1-抗胰蛋白酶(α1AT)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Neuregulin 1 (NRG1) 小鼠神经调节素1(NRG1)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3) 小鼠转化生长因子β3(TGFβ3)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 小鼠血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)检测试剂盒96t/48t
ELISA Kit for Toll Like Receptor 7 (TLR7) 小鼠Toll样受体7(TLR7)检测试剂盒96t/48t
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