NCI-H647人非小细胞肺癌细胞
货号 | 规格 | 种属 | 组织来源 |
AXB6542 | 1 X 106cells/T25或1 mL冻存管 | 人 | 肺 |
商品介绍:
产品名称 | NCI-H647人非小细胞肺癌细胞 |
英文名 | NCIH647:NCI-H647 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
冻存条件 | 90% FBS + 10% DMSO |
传代方法 | 1:3传代, 2-3天传1代 |
种属来源:人
性别年龄:3岁,白人男性
组织来源:肺
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
细胞规格:1 X 106cells/T25或1 mL冻存管
培养条件:RPMI1640 +10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
冻存条件:90% FBS + 10% DMSO
传代方法:1:3传代, 2-3天传1代
细胞培养操作
干冰运输:收到细胞后需立即转入液氮保存、或者-80°C冰箱短期冻存、或者直接复苏
常温运输:收到细胞后,请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出,并按照下方操作步骤进行培养传代
细胞传代:细胞密度达80% - 90%,即可进行传代培养
培养瓶中细胞操作步骤
对于贴壁培养的细胞,寄送前,我们会将培养基充满整个培养瓶,以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。
1.收到细胞后,请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因为运输过程中存在颠簸,且有些细胞对温度变化也很敏感,可能存在一些细胞脱落漂浮的情况,这些细胞仍是活细胞,请勿丢弃,可离心富集后传代使用。
2.对于贴壁细胞,在生物安全柜环境中,用真空泵去除培养瓶中多余的培养基,至剩余5-8mL 左右,随后根据培养基选择合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养,拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶,请立即传代。
3.对于悬浮的细胞,在生物安全柜环境中,转移培养瓶中的细胞至离心管,150 g 离心 5 分钟,去除上清后,用5 mL培养基吹散细胞,转移至新的培养瓶中,随后置于合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养。
冻存管细胞操作步骤
注意: 为保证细胞的高活率,请收到产品后,立即解冻培养。
1.将冻存管置于37℃水浴中来回晃动,迅速解冻。为避免污染,确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速,大约1分钟。
2.一旦冻存管中液体融化后,立即取出,采用酒精喷拭冻存管表面。从此步开始,后续操作须在生物安全柜中完成。
3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中,150 g 离心 5 分钟,用真空泵去除上清。
4.用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率,请将培养基在37℃水浴预热后使用。
5.将细胞置于含有合适CO2的37℃恒温培养箱中培养。
贴壁细胞传代培养
1.吸取并弃掉培养瓶中培养基,加入PBS润洗一次。
2.加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液,并置于37℃培养箱中孵育,直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3-5分钟。
3.加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶,并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落,并使细胞分散。
4.将细胞悬液收集到15mL离心管里,150 g 离心 5 分钟,用真空泵去除上清。取适量的培养基将细胞重悬,转移到新的培养瓶中培养。
悬浮细胞传代可参考以下方法:
一、直接传代法
1.待悬浮细胞长满至 80%~90%(细胞悬液变黄),即可传代;
2.用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2~1 / 3;
3.加入适量的新鲜培养基,继续培养。
二、离心传代法(在发现有细胞碎片的情况下)
1.将细胞悬液转移到离心管内;
2.150 g 离心 5 min,弃去上层清液;
3.使用新鲜的培养基重悬细胞;
4.吸管吸取适量细胞悬液,装入新的培养瓶,再加入适量的新鲜培养基,继续培养。
细胞冻存操作
1.1000rpm离心5分钟去掉上清。加1 mL血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1 x 106/mL,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识;
2.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80°C冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。
细胞培养的步骤:
细胞培养前的准备:
细胞变质的征象包括核周出现颗粒、细胞与基质解离以及细胞质空泡形成。
这些变质征象可能为多种原因所致,例如:培养物污染、细胞系衰老或培养基中存在毒性物质,或者这些征象仅表明培养物需要更换培养基。
变质严重时将会成为不可逆的变化。
细胞培养通风橱的消毒及布局
保持细胞培养通风橱内的整洁有序,将所有物品置于直视范围内。
向放入通风橱内的所有物品喷洒70%乙醇,擦拭清洁进行消毒。
在通风橱中部开阔处放置细胞培养容器;移液器置于右前方易于取用;试剂和培养基置于右后方便于吸取;试管架置于中后部;小型容器置于左后部用于盛放废液。
培养瓶/皿等物品的无菌操作
细胞培养污染物主要分为两类:
化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。
生物污染物,如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。
可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术,降低污染发生的频率和严重程度。
细胞系要求及注意事项:
实验中建立细胞系有以下要求:
1、组织来源:
细胞供体所属物种,来自人体或者动物;
个体性别、年龄;取材的器官或组织。
如系肿瘤组织,应说明临床和病理诊断,以及病li号等。
2、细胞生物学检测:
了解细胞一般和特殊的生物学性状,如细胞一般形态,特异结构,细胞生长曲线和分裂指数,倍增时间,接种率等。
如为肿瘤细胞,为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性,须做软琼脂培养,异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。
3、培养条件和方法:
应说明细胞系(或株)适应的生存环境,即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。
实验中建立细胞系需要注意事项:
1. 细胞的来源和健康程度需要保证,不能使用受到污染或者有疾病的细胞。
2. 实验室需要保持清洁和卫生,定期进行消毒,以避免细胞受到感染。
3. 细胞需要充足的营养和生长因子,以促进其生长和繁殖。
4. 温度和湿度的控制对于细胞的生长也非常重要,实验室需要有恒温恒湿设备。
5. 实验室需要配备各种安全设备,例如防火设备、急救箱等,保证实验的顺利进行和人员的安全。
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