HGC-27+YFP人胃癌细胞黄色荧光标记
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货号 | 规格 | 种属 | 鉴定 |
A01X759 | 1×106 | 人 | STR鉴定 |
商品介绍:
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产品名称 | HGC-27+YFP人胃癌细胞黄色荧光标记 |
产品别称 |
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生长特性 | 贴壁生长 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
冻存条件 |
|
温度 | 液氮 |
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细胞介绍:
该细胞通过慢病毒转染的方式携带 YFP 基因。
细胞特性
1) 来源:人胃癌
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x10^6 细胞数
4) 规格:T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
细胞筛选:
该细胞为稳定转染 YFP 的细胞,随细胞传代次数的增加,其 YFP 荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。 建议收到细胞后至少传 3 代,冻存留种后再进行筛选。
初次进行细胞筛选时,建议加入终浓度为 1ug/ml 嘌呤霉素的培养基维持培养,若无细胞漂浮或者漂浮较少,即可更换为含 2ug/ml 嘌呤霉素的培养基继续筛选,以此类推,至最高药物浓度为 5ug/ml。
若筛选过程中,漂浮细胞大于 60%,则停止筛选,换成正常培养基培养,至细胞密度约 80%,可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入 5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖,可停止筛选,用不含药培养基正常培养。
运输和保存:干冰运输及复苏好存活细胞:
(1)1mL 冻存管包装干冰运输,收到后-80 度
冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细
胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25 瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理:
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在 4 或 5X 显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在 37℃培养箱中放置 2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在 60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的培养基 6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达 70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培
养条件新配制的培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 T25 培养瓶 1:2 传代。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备 DMEM 培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37 摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二.细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏::
将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含 4-6mL 培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min,弃去上清液,培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8ml 培养基的培养瓶(或皿)中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加入 0.25%(w / v)胰dan白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中(T25 瓶 1-2mL,T75 瓶 2-3mL),置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 3-5min,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中,添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25 瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×10^6~1×10^7个活细胞/ml.
2. 1000rpm 离心 3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每 1ml 冻存液含 1×10^6~1×10^7个活细胞/ml 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80 度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
细胞培养的步骤:
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细胞培养前的准备:
细胞变质的征象包括核周出现颗粒、细胞与基质解离以及细胞质空泡形成。
这些变质征象可能为多种原因所致,例如:培养物污染、细胞系衰老或培养基中存在毒性物质,或者这些征象仅表明培养物需要更换培养基。
变质严重时将会成为不可逆的变化。
细胞培养通风橱的消毒及布局
保持细胞培养通风橱内的整洁有序,将所有物品置于直视范围内。
向放入通风橱内的所有物品喷洒70%乙醇,擦拭清洁进行消毒。
在通风橱中部开阔处放置细胞培养容器;移液器置于右前方易于取用;试剂和培养基置于右后方便于吸取;试管架置于中后部;小型容器置于左后部用于盛放废液。
培养瓶/皿等物品的无菌操作
细胞培养污染物主要分为两类:
化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。
生物污染物,如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。
可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术,降低污染发生的频率和严重程度。
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细胞系要求及注意事项:
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实验中建立细胞系有以下要求:
1、组织来源:
细胞供体所属物种,来自人体或者动物;
个体性别、年龄;取材的器官或组织。
如系肿瘤组织,应说明临床和病理诊断,以及病li号等。
2、细胞生物学检测:
了解细胞一般和特殊的生物学性状,如细胞一般形态,特异结构,细胞生长曲线和分裂指数,倍增时间,接种率等。
如为肿瘤细胞,为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性,须做软琼脂培养,异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。
3、培养条件和方法:
应说明细胞系(或株)适应的生存环境,即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。
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实验中建立细胞系需要注意事项:
1. 细胞的来源和健康程度需要保证,不能使用受到污染或者有疾病的细胞。
2. 实验室需要保持清洁和卫生,定期进行消毒,以避免细胞受到感染。
3. 细胞需要充足的营养和生长因子,以促进其生长和繁殖。
4. 温度和湿度的控制对于细胞的生长也非常重要,实验室需要有恒温恒湿设备。
5. 实验室需要配备各种安全设备,例如防火设备、急救箱等,保证实验的顺利进行和人员的安全。
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人颈静脉球瘤细胞 | 玛尔摩分枝杆菌PCR试剂盒 |
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人肺腺癌成纤维细胞 | 鸽痘病毒PCR检测试剂盒 |
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人腔静脉外膜成纤维细胞 | 副溶血性弧菌PCR试剂盒 |
人主动脉外膜成纤维细胞 | 偷死野田村病毒RT-PCR试剂盒 |
人心脏微血管内皮细胞 | 虾肝肠微胞虫PCR检测试剂盒 |
人主动脉瓣膜间质细胞 | 弗格森埃立克体PCR检测试剂盒 |
人冠状动脉内皮细胞 | 弗格森艾利希体PCR试剂盒 |
人冠状动脉平滑肌细胞 | 细刺奥斯特线虫PCR试剂盒 |
人颈动脉内皮细胞 | HGC-27+YFP人胃癌细胞黄色荧光标记猪嵴病毒库布病毒PCR检测试剂盒 |
人颈动脉平滑肌细胞 | 难辨梭状芽孢杆菌毒suAELISA试剂盒 |
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