HGC-27+YFP人胃癌细胞黄色荧光标记

HGC-27+YFP人胃癌细胞黄色荧光标记

商品介绍：

细胞介绍：

　　该细胞通过慢病毒转染的方式携带 YFP 基因。

　　细胞特性

　　1） 来源：人胃癌

　　2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

　　3） 含量：>1x10^6 细胞数

　　4） 规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装

　　5) 用途：仅供科研使用。

　　细胞筛选：

　　该细胞为稳定转染 YFP 的细胞，随细胞传代次数的增加，其 YFP 荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。 建议收到细胞后至少传 3 代，冻存留种后再进行筛选。

　　初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为 1ug/ml 嘌呤霉素的培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含 2ug/ml 嘌呤霉素的培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为 5ug/ml。

　　若筛选过程中，漂浮细胞大于 60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约 80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入 5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药培养基正常培养。

　　运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：

　　（1）1mL 冻存管包装干冰运输，收到后-80 度

　　冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细

　　胞有污染，请立即与我们联系。

　　（2）T25 瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

　　细胞接收后的处理：

　　1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

　　2）请在 4 或 5X 显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

　　3）贴壁细胞：细胞在 37℃培养箱中放置 2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在 60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的培养基 6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达 70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

　　4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培

　　养条件新配制的培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 T25 培养瓶 1：2 传代。

　　细胞培养步骤

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　1）准备 DMEM 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　1） 冻存细胞的复苏：：

　　将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8ml 培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2） 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

　　1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

　　2. 加入 0.25％（w / v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

　　3.轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。

　　3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25 瓶为例；

　　1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×10^6~1×10^7个活细胞/ml.

　　2. 1000rpm 离心 3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每 1ml 冻存液含 1×10^6~1×10^7个活细胞/ml 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

　　3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80 度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

　　注意事项：

　　1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

　　2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

细胞培养的步骤：

细胞培养前的准备：

细胞变质的征象包括核周出现颗粒、细胞与基质解离以及细胞质空泡形成。

这些变质征象可能为多种原因所致，例如：培养物污染、细胞系衰老或培养基中存在毒性物质，或者这些征象仅表明培养物需要更换培养基。

变质严重时将会成为不可逆的变化。

细胞培养通风橱的消毒及布局

保持细胞培养通风橱内的整洁有序，将所有物品置于直视范围内。

向放入通风橱内的所有物品喷洒70%乙醇，擦拭清洁进行消毒。

在通风橱中部开阔处放置细胞培养容器；移液器置于右前方易于取用；试剂和培养基置于右后方便于吸取；试管架置于中后部；小型容器置于左后部用于盛放废液。

培养瓶/皿等物品的无菌操作

细胞培养污染物主要分为两类：

化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。

生物污染物，如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。

可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术，降低污染发生的频率和严重程度。

细胞系要求及注意事项：

实验中建立细胞系有以下要求：

1、组织来源：

细胞供体所属物种，来自人体或者动物；

个体性别、年龄；取材的器官或组织。

如系肿瘤组织，应说明临床和病理诊断，以及病li号等。

2、细胞生物学检测：

了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。

如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。

3、培养条件和方法：

应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。

实验中建立细胞系需要注意事项：

1. 细胞的来源和健康程度需要保证，不能使用受到污染或者有疾病的细胞。

2. 实验室需要保持清洁和卫生，定期进行消毒，以避免细胞受到感染。

3. 细胞需要充足的营养和生长因子，以促进其生长和繁殖。

4. 温度和湿度的控制对于细胞的生长也非常重要，实验室需要有恒温恒湿设备。

5. 实验室需要配备各种安全设备，例如防火设备、急救箱等，保证实验的顺利进行和人员的安全。
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