HELA+LUC 人宫颈癌细胞荧光素酶标记

HELA+LUC  人宫颈癌细胞荧光素酶标记

商品介绍：

细胞介绍

角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。 有报告称MS751细胞含有人乳头状瘤病毒18 (HPV-18)序列。据报道，p53表达水平低，pRB(成视网膜细胞瘤抑制因子)表达水平正常。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

细胞特性

1） 来源：宫颈腺癌

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1×10⁶ 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞接收后的处理

1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的培养基）。

6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4 . 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议客户冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1×10⁶个细胞冻存。

3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

细胞培养的步骤：

细胞培养前的准备：

细胞变质的征象包括核周出现颗粒、细胞与基质解离以及细胞质空泡形成。

这些变质征象可能为多种原因所致，例如：培养物污染、细胞系衰老或培养基中存在毒性物质，或者这些征象仅表明培养物需要更换培养基。

变质严重时将会成为不可逆的变化。

细胞培养通风橱的消毒及布局

保持细胞培养通风橱内的整洁有序，将所有物品置于直视范围内。

向放入通风橱内的所有物品喷洒70%乙醇，擦拭清洁进行消毒。

在通风橱中部开阔处放置细胞培养容器；移液器置于右前方易于取用；试剂和培养基置于右后方便于吸取；试管架置于中后部；小型容器置于左后部用于盛放废液。

培养瓶/皿等物品的无菌操作

细胞培养污染物主要分为两类：

化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。

生物污染物，如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。

可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术，降低污染发生的频率和严重程度。

细胞系要求及注意事项：

实验中建立细胞系有以下要求：

1、组织来源：

细胞供体所属物种，来自人体或者动物；

个体性别、年龄；取材的器官或组织。

如系肿瘤组织，应说明临床和病理诊断，以及病li号等。

2、细胞生物学检测：

了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。

如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。

3、培养条件和方法：

应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。

实验中建立细胞系需要注意事项：

1. 细胞的来源和健康程度需要保证，不能使用受到污染或者有疾病的细胞。

2. 实验室需要保持清洁和卫生，定期进行消毒，以避免细胞受到感染。

3. 细胞需要充足的营养和生长因子，以促进其生长和繁殖。

4. 温度和湿度的控制对于细胞的生长也非常重要，实验室需要有恒温恒湿设备。

5. 实验室需要配备各种安全设备，例如防火设备、急救箱等，保证实验的顺利进行和人员的安全。
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