2024/01/11 11:56
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产品配置单:
人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA试剂盒
型号: 96T/48T
产地:
品牌: 远慕
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方案详情:
中文名称:人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA检测试剂盒
英文名称: Human plasminogen activator,PLGA elisa kit
规格:96T/48T
试剂盒成分:酶标板,试剂,标准品等。
种属:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等
用途:用于定量检测血清、血浆及相关液体样本中人纤溶酶原激活剂PLGA的含量。
ELISA试剂盒实验操作步骤包括:从包被,封闭,加样,洗涤,加显色底物,终止液加入,到读书操作,还有标准曲线制作等详尽的操作说明。
试剂盒组成及试剂配制:
1. 产品仅用于科研酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。 (2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,*终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
注:所用溶液配方
(1) PBS:称取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl,加双蒸水至1000ml。
(2)包被缓冲液:称取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3,加双蒸水至 1000m1。
(3)洗涤液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS。
(4)稀释液:含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS,主要用以稀释抗体、标准品、样品。
(5)TMB显色液:称取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g柠檬酸,加双蒸水至1O0ml,配成柠檬酸-磷酸缓冲溶液。用10.5 ml 柠檬酸-磷酸缓冲溶液溶解1锭TMB,再加入35μl 3% H2O2
(6)细胞裂解液:1% TritonX-100,137mmol/L NaCl,20mmol/L Tris-HCl,2mmol/L EDTA,1mmol/L PMSF,pH 7.4。(其中PMSF溶于异丙醇中,配成1O mmo/L,-20℃ 贮存备用。
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