【结缔组织染色】弹力纤维与胶原纤维染色实验

实验方法原理

弹力纤维由随机交联盘绕的一些肽链组成，含有丰富的二硫键糖蛋白成分，所以可称为弹性蛋白。易与染色液中碱基结合，为了能够更好地显示弹力纤维和胶原纤维成分，选用维多利亚蓝、丽春红和苦味酸组合双重染色方法。

实验材料

石蜡组织切片

试剂、试剂盒

维多利亚蓝 糊精 间苯二酚 蒸馏水 乙醇 三氯化铁水溶液 浓盐酸 苯酚二甲苯 中性树胶

仪器、耗材

60 ℃恒温箱 滤纸

实验步骤

维多利亚蓝染色液：维多利亚蓝（Victoria blue）2 g，糊精 0.5 g，间苯二酚 4 g，蒸馏水 200 ml。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约 5min。然后用另一容器取 30％ 三氯化铁水溶液 25 ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中，继续煮沸 3 min，不断搅拌溶液呈胶冻状。去火，冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸一起放在 60℃ 恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再将其溶于 400 ml 的 70％ 乙醇液中。然后加浓盐酸 4 ml 和苯酚 5 g，放置至成熟后使用。

1. 石蜡组织切片，常规脱蜡至水。

2. 切片入 70％ 乙醇中洗 2 min。

3. 将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染 2～5 h。

4. 直接入 95％ 乙醇中分色数秒钟。

5. 用蒸馏水洗 2 min。

6. 用丽春红-苦味酸染色液滴染切片 3 min。

7. 直接用无水乙醇冲洗多余染色液 2 次。

8. 二甲苯透明和中性树胶封固。

注意事项

1. 维多利亚蓝染色液可在室温中存放较长时间，染色液浸染后倒回原处，可反复使用。

2. 95％ 乙醇分色后，立即浸入水中，可用显微镜观察染色程度，如果较浅或较深，可再重复染色或分色。

其他

结果：弹力纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈黄色。