一、MM.IR 人多发性骨髓瘤细胞基本信息
细胞名称
| MM.IR 人多发性骨髓瘤细胞 |
别称
| MM.IR |
货号
| XY-H574 |
规格
| 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
种属来源 | 人
|
组织来源 | 外周血 |
细胞类型
| 肿瘤细胞 |
生长方式
| 悬浮和轻微贴壁细胞 |
描述
| 该细胞系的母细胞株MM.1是从一位对类固醇疗法产生抗药性的多发性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R对地塞米松耐药。近缘细胞系MM.1S也是从MM.1中分离出来的,但对地塞米松敏感。该细胞复苏后需要两周左右才能恢复正常生长。 |
培养条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
冻存液配方
| 无血清细胞冻存液(XYC90100)
|
换液频率
| 传代时换液,半换液法 |
传代周期
| 细胞密度不宜超过1×10^6细胞/ml |
传代比例
| 接种细胞密度在3-4×10^5细胞/ml
|
供应限制
| 仅供研究之用。
|
细胞货期
| 2-3天左右
|
二、细胞培养操作
1. 细胞复苏-悬浮细胞
第一步:准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记,预热好的细胞完全培养基,一支15ml离心管,离心管中加入4-5ml细胞完全培养基。
第二步:取出细胞冻存管,在37度水浴中快速解冻,将管子擦干消毒后迅速拿回生物安全柜。
第三步:将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中,1000转离心5分钟。
第四步:倒掉上清,加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
第五步:将重悬好的细胞转移到T25细胞培养瓶,补充培养基到5ml左右,十字摇晃,将细胞铺匀后放入培养箱培养。
2. 细胞传代
第一种方法:
细胞密度达到1×106细胞/ml时,1000转离心5分钟收集细胞,弃上清,加入新鲜培养基,使细胞密度在3-4×105细胞/ml.
第二种方法:
细胞密度达到1×106细胞/ml时,将培养瓶中的细胞悬液分装到新的培养瓶,并补充新鲜培养基,使细胞密度在3-4×105细胞/ml.
3. 细胞冻存
将培养瓶中的细胞悬液转移到离心管中,1000转离心5分钟收集细胞,弃上清,加入冻存液,重悬细胞,并分装到冻存管,冻存密度1-2×106细胞/ml。将冻存管放入程序降温盒,并放到-80℃冰箱,过夜后将冻存管转移到液氮保存。
1. 细胞复苏-贴壁细胞
1.1 离心法
第一步:准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记,预热好的细胞完全培养基,一支 15ml离心管,离心管中加入 4-5ml 细胞完全培养基。
第二步:取出细胞冻存管,在 37 度水浴中快速解冻,将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。
第三步:将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中,1000 转离心 5 分钟。
第四步:倒掉上清,加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
第五步: 将重悬好的细胞转移到 T25 细胞培养瓶,补充培养基到 8ml 左右,十字摇晃,将细胞铺匀后放入培养箱培养。
1.2 不离心法
第一步:准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记,预热好的细胞完全培养基,培养瓶中加入 8ml 左右培养基。
第二步: 取出细胞冻存管,在 37 度水浴中快速解冻,将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。
第三步:将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中,十字摇晃,将细胞铺匀后放入培养箱培养,接种 16 小时后更换培养基。
2. 细胞传代
第一步:准备细胞完全培养基,细胞培养瓶,胰酶(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA),DPBS。
第二步:弃上清,并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。
第三步:加入 1ml 胰酶,室温或者 37 度消化,直到细胞成片脱落,加入 3-4ml 完全培养基终止消化,如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。
第四步:收集细胞悬液,1000 转离心 5 分钟,弃上清,加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
第五步:将重悬好的细胞按比例分装至 T25 细胞培养瓶,补充培养基到 8ml 左右,十字摇晃, 将细胞铺匀后放入培养箱培养。
3. 细胞冻存
第一步:准备细胞冻存液,细胞冻存管,胰酶(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA),DPBS。
第二步:弃上清,并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。
第三步:加入 1ml 胰酶,室温或者 37 度消化,直到细胞成片脱落,加入完全培养基终止消化,如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。
第四步:收集细胞悬液,1000 转离心 5 分钟,弃上清。
第五步:加入冻存液,重悬细胞,并分装到冻存管,冻存密度 0.8-1.5×106 细胞/ml。
第六步:将冻存管放入程序降温盒,并放到-80℃冰箱,过夜后将冻存管转移到液氮保存。
三、细胞系收货须知
收到的货物会包含以下几种类型,您的货物属于:
1. 细胞冻存管:收到货物后,请检查箱子里面是否还有干冰。
1.1 若干冰已剩余不多,不能掩埋冻存管,请及时拍照,并第一时间联系销售。
1.2 若干冰充裕,可以安排复苏细胞;不安排复苏,请将细胞冻存管转移到液氮进行保存。短期(一周内)的存放可以放在-80 冰箱,建议最好保存在液氮中。
2. 培养瓶的活细胞:收到请检查培养瓶是否完好,是否有漏液,培养基是否浑浊
2.1 若出现以上问题请于当天和我们销售取得联系,我们会第一时间为您处理。
2.2 若以上问题都没有出现:拆掉培养瓶的外包装,在显微镜下对细胞进行多个视野,不同倍镜拍照。然后用酒精对瓶身进行彻底消毒,放在 37 度二氧化碳培养箱中进行复温。1-2 小时后,拿出在显微镜下观察,并进行多个视野不同倍镜拍照。若细胞达到了可以传代的密度,请及时进行传代。若细胞密度不能进行传代,请回收培养瓶中的培养基,留适量培养基在瓶中,并将培养瓶放在培养箱继续培养即可。
3. 消化后的细胞悬液:收到请检查管子是否有漏液
3.1 若漏液,请当天和我们销售取得联系,我们会第一时间为您处理。
3.2 若完好,将管子用酒精彻底消毒,收集细胞悬液到离心管,1000 转,离心 5 分钟,弃上清,加入培养基重悬,按照比例分装到 T25 培养瓶,并补充培养基到 ml 即可。
四、注意事项
1、建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养基可回收使用,保存在4度可使用一周。
2、不同实验室操作上会有些许差异,为了避免细胞不适应,请先按照说明书推荐的方法和操作步骤培养,待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。
3、建议收到细胞后,前几代及时冻存一些细胞,并最好是可以多冻存几个批次。
4、该细胞复苏存活率偏低,且状态恢复需要1-2周时间,复苏后一周内避免离心,细胞有少量增殖时,补加培养基即可。
5、该细胞在受到刺激后,会出现聚团增多现象。比如在运输时候,由于温度和二氧化碳浓度都达不到培养箱的标准,在收到货后会出现大量的聚团情况。这种状况在恢复正常培养条件后养1周左右就可以恢复。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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