考马斯亮蓝染色脱色液实验要点
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—氯仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。考马斯亮蓝染色脱色液小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
考马斯亮蓝染色脱色液注意
1. 对大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。
2. 煮沸法中添加溶菌酶有一定限度,浓度高时,细菌裂解效果反而不好。有时不同溶菌酶也能溶菌。
3. 提取的质粒DNA 中会含有RNA,但RNA 并不干扰进一步实验,如限制性内切酶消化,亚克隆及连接反应等。
考马斯亮蓝染色脱色液其它产品信息:
xy-E10824 人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒
xy-E10825 人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA试剂盒
xy-E10826 人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA试剂盒
xy-E10827 人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA试剂盒
xy-E10828 人脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒
xy-E10829 人骨胶原交联(Cr)ELISA试剂盒
xy-E10830 人Ⅰ型前胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试剂盒
xy-E10831 人脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒
xy-E10832 人吡啶交联物(PY)ELISA试剂盒
xy-E10833 人骨桥素(OPN)ELISA试剂盒
xy-E10834 人γ氨基丁酸(GABA)ELISA试剂盒
xy-E10835 人P物质受体(SP-R)ELISA试剂盒
xy-E10836 人环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒
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xy-E10838 人内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒
xy-E10839 人横纹肌辅肌动蛋白α (sm Actinin-α )ELISA试剂盒
xy-E10840 人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA试剂盒
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xy-E10843 人肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒
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xy-E10846 人脂联素(ADP)ELISA试剂盒
xy-E10847 人组胺(HIS)ELISA试剂盒
xy-E10848 人抵抗素(Resistin)ELISA试剂盒
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