一、PC-12(高分化) 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)基本信息
细胞名称
| PC-12(高分化) 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化) |
别称
| PC12高分化;大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 高分化 |
货号
| XY-R003A |
规格
| 1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 |
种属来源 | 大鼠 |
组织来源 | 肾上腺嗜铬细胞瘤 |
细胞类型
| 肿瘤细胞 |
生长方式
| 贴壁/悬浮 |
描述
| PC-12(高分化)细胞来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。这些细胞表达神经生长因子(NGF)受体。NGF可诱导产生神经表型。这些细胞不合成肾上腺素。 |
培养条件 | 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃ |
冻存液配方
| 无血清细胞冻存液(XYC90100)
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换液频率
| 传代时换液,半换液法 |
传代周期
| 细胞密度不宜超过1×10^6细胞/ml |
传代比例
| 接种细胞密度在3-4×10^5细胞/ml
|
供应限制
| 仅供研究之用。
|
细胞货期
| 2-3天左右
|
二、细胞培养操作
1. 细胞复苏-悬浮细胞
第一步:准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记,预热好的细胞完全培养基,一支15ml离心管,离心管中加入4-5ml细胞完全培养基。
第二步:取出细胞冻存管,在37度水浴中快速解冻,将管子擦干消毒后迅速拿回生物安全柜。
第三步:将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中,1000转离心5分钟。
第四步:倒掉上清,加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
第五步:将重悬好的细胞转移到T25细胞培养瓶,补充培养基到5ml左右,十字摇晃,将细胞铺匀后放入培养箱培养。
2. 细胞传代
第一种方法:
细胞密度达到1×106细胞/ml时,1000转离心5分钟收集细胞,弃上清,加入新鲜培养基,使细胞密度在3-4×105细胞/ml.
第二种方法:
细胞密度达到1×106细胞/ml时,将培养瓶中的细胞悬液分装到新的培养瓶,并补充新鲜培养基,使细胞密度在3-4×105细胞/ml.
3. 细胞冻存
将培养瓶中的细胞悬液转移到离心管中,1000转离心5分钟收集细胞,弃上清,加入冻存液,重悬细胞,并分装到冻存管,冻存密度1-2×106细胞/ml。将冻存管放入程序降温盒,并放到-80℃冰箱,过夜后将冻存管转移到液氮保存。
1. 细胞复苏-贴壁细胞
1.1 离心法
第一步:准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记,预热好的细胞完全培养基,一支 15ml离心管,离心管中加入 4-5ml 细胞完全培养基。
第二步:取出细胞冻存管,在 37 度水浴中快速解冻,将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。
第三步:将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中,1000 转离心 5 分钟。
第四步:倒掉上清,加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
第五步: 将重悬好的细胞转移到 T25 细胞培养瓶,补充培养基到 8ml 左右,十字摇晃,将细胞铺匀后放入培养箱培养。
1.2 不离心法
第一步:准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记,预热好的细胞完全培养基,培养瓶中加入 8ml 左右培养基。
第二步: 取出细胞冻存管,在 37 度水浴中快速解冻,将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。
第三步:将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中,十字摇晃,将细胞铺匀后放入培养箱培养,接种 16 小时后更换培养基。
2. 细胞传代
第一步:准备细胞完全培养基,细胞培养瓶,胰酶(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA),DPBS。
第二步:弃上清,并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。
第三步:加入 1ml 胰酶,室温或者 37 度消化,直到细胞成片脱落,加入 3-4ml 完全培养基终止消化,如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。
第四步:收集细胞悬液,1000 转离心 5 分钟,弃上清,加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
第五步:将重悬好的细胞按比例分装至 T25 细胞培养瓶,补充培养基到 8ml 左右,十字摇晃, 将细胞铺匀后放入培养箱培养。
3. 细胞冻存
第一步:准备细胞冻存液,细胞冻存管,胰酶(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA),DPBS。
第二步:弃上清,并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。
第三步:加入 1ml 胰酶,室温或者 37 度消化,直到细胞成片脱落,加入完全培养基终止消化,如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。
第四步:收集细胞悬液,1000 转离心 5 分钟,弃上清。
第五步:加入冻存液,重悬细胞,并分装到冻存管,冻存密度 0.8-1.5×106 细胞/ml。
第六步:将冻存管放入程序降温盒,并放到-80℃冰箱,过夜后将冻存管转移到液氮保存。
三、细胞系收货须知
收到的货物会包含以下几种类型,您的货物属于:
1. 细胞冻存管:收到货物后,请检查箱子里面是否还有干冰。
1.1 若干冰已剩余不多,不能掩埋冻存管,请及时拍照,并第一时间联系销售。
1.2 若干冰充裕,可以安排复苏细胞;不安排复苏,请将细胞冻存管转移到液氮进行保存。短期(一周内)的存放可以放在-80 冰箱,建议最好保存在液氮中。
2. 培养瓶的活细胞:收到请检查培养瓶是否完好,是否有漏液,培养基是否浑浊
2.1 若出现以上问题请于当天和我们销售取得联系,我们会第一时间为您处理。
2.2 若以上问题都没有出现:拆掉培养瓶的外包装,在显微镜下对细胞进行多个视野,不同倍镜拍照。然后用酒精对瓶身进行彻底消毒,放在 37 度二氧化碳培养箱中进行复温。1-2 小时后,拿出在显微镜下观察,并进行多个视野不同倍镜拍照。若细胞达到了可以传代的密度,请及时进行传代。若细胞密度不能进行传代,请回收培养瓶中的培养基,留适量培养基在瓶中,并将培养瓶放在培养箱继续培养即可。
3. 消化后的细胞悬液:收到请检查管子是否有漏液
3.1 若漏液,请当天和我们销售取得联系,我们会第一时间为您处理。
3.2 若完好,将管子用酒精彻底消毒,收集细胞悬液到离心管,1000 转,离心 5 分钟,弃上清,加入培养基重悬,按照比例分装到 T25 培养瓶,并补充培养基到 ml 即可。
四、注意事项
1、建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养基可回收使用,保存在4度可使用一周。
2、不同实验室操作上会有些许差异,为了避免细胞不适应,请先按照说明书推荐的方法和操作步骤培养,待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。
3、建议收到细胞后,前几代及时冻存一些细胞,并最好是可以多冻存几个批次。
4、该细胞复苏存活率偏低,且状态恢复需要1-2周时间,复苏后一周内避免离心,细胞有少量增殖时,补加培养基即可。
5、该细胞在受到刺激后,会出现聚团增多现象。比如在运输时候,由于温度和二氧化碳浓度都达不到培养箱的标准,在收到货后会出现大量的聚团情况。这种状况在恢复正常培养条件后养1周左右就可以恢复。
仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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