基毒分析
背景介绍
USP 亚硝胺杂质通则确定应在药品中检测的六种亚硝胺包括:N-亚硝基二甲胺(NDMA)、N-亚硝基二乙胺(NDEA)、N-亚硝基二异丙胺(NDIPA)、N-亚硝基乙基异丙胺(NEIPA)、N-亚硝基二丁胺(NDBA)和N-亚硝基甲基氨基丁酸(NMBA),并且提出了四种分析方法,包括:LC-HRMS、HS+GC-MS/MS、LC-MS/MS和GC-MS/MS方法,生产商可以使用这些方法来检测产品中是否存在亚硝胺杂质。
专为客户解决分析领域各种疑难杂症的艾思吉老师,看到USP通则发布,主动请缨做第一个“吃螃蟹”的人,重现通则,希望通过实际实验提前将可能遇到的问题排查。不出所料,难点重重,好在都被机智的艾思吉老师逐一攻克了。欣喜之余,艾思吉老师也想把新鲜出炉的解决方案和各位粉丝共同分享。
文末附解决方案及精美好礼!
ShimNex S-GTIs(3 μm,4.6×150 mm;P/N:380-01247-31)
NDMA假阳性
一柱搞定
由于NDMA和DMF的同位素的M/Z相近,且MS2扫描图有m/z接近的碎片,在三重四极杆质谱上难以区分,而常规色谱柱又难以分离NDMA和DMF,所以常规解决方案是选用分辨率更高的仪器进行鉴定,比如Q-TOF。
然而,如果能用一支色谱柱去解决DMF干扰造成的NDMA假阳性的问题,降本又高效,何乐而不为呢?
艾思吉老师收集了实验室里各种宝贝色谱柱,并逐一测试,锲而不舍,最终筛选出了一支“神柱”-基毒专用柱(ShimNex S-GTIs,3 μm,4.6×150 mm;P/N:380-01247-31),终于把“形影不离”的NDMA和DMF“拆散”了!
同分异构体的分离
还是那支“神柱”
对于NMBA及NEIPA的顺反异构体可以将峰面积分别合并计算,但对于NDPA和NDIPA、NDBA和NDIBA这两组同分异构体,若同时检测需要分开计算。常规的色谱柱很难实现异构体的分离,而质谱端M/Z相同,无法区分。
艾思吉老师又把这支“神柱”(ShimNex S-GTIs,3 μm,4.6×150 mm;P/N:380-01247-31)应用到了两组异构体的分离,果然是“神柱”,真的分开了!
NDMA灵敏度不够
有诀窍
由于NDMA分子量较小,基线容易波动造成灵敏度降低,实验发现流动相中有机相比例越低,NDMA灵敏度越高。
艾思吉老师采用了更高的流速0.8mL/min达到了灵敏度更高的目的,同时选用了4.6 mm内径的基毒专用柱ShimNex S-GTIs(P/N:380-01247-31)以满足更低的柱压。
离子通道干扰
用“神器”
NDBA、NDIBA、NEPhA等离子通道容易有干扰,影响杂质的准确定量,可以通过安装鬼峰捕集小柱Ghost Trap(PN:228-59921-92)排除干扰。
空针-不连接Gost trap
空针-连接其他鬼峰柱
空针-连Gost trap DS 7.6*30mm
(PN:228-59921-92)
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空针-不连接Gost trap
空针-连Gost trap DS 7.6*30mm
(PN:228-59921-92)
更多亚硝胺杂质的筛查
筛查包
虽然USP规定了6种亚硝胺杂质,但艾思吉老师希望通过建立一个筛查方法,实现更多种亚硝胺杂质的监测,最终建立了包括但不限于USP以及EP规定的共计13种亚硝胺杂质的筛查方案。
*黄色标记为USP规定的6种亚硝胺杂质
结语
艾思吉老师针对NDMA假阳性、同分异构体分离、NDMA灵敏度不够、离子通道干扰提出了相应的解决方案,同时针对13种亚硝胺杂质建立了同时测定的筛查方法,更具体的内容您可以查看本期其它三篇文章。
如果您还有其他好的建议,也欢迎随时和我们分享~艾思吉老师就先退下继续解决大家的实验问题啦~
问卷有礼
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