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T-2毒素检测试剂盒 本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定谷物中T-2毒素。该测试盒反应板可拆卸,可测单份样品,也可测多份样品。定量分析需有含450nm波长的微孔板酶标仪。 1 概要 T-2毒素(T-2 toxin)主要是由镰孢属的拟枝孢镰孢(F. sporotrichioides)等产生的有毒代谢产物,属单端孢霉烯族化合物A型,对人畜具有较大的危害。该毒素是体内蛋白质合成的抑制剂,人畜误食后,可引起呕吐、腹泻、发热等急性中毒症状,严重时可损伤造血组织、造成死亡。因此对人类健康和畜牧业发展构成潜在威胁。 目前检测粮食和饲料中T-2毒素的仪器方法有液相色谱、气相色谱、质谱和毛细管电泳法等,这些方法灵敏度较高,结果稳定,但所需仪器设备昂贵,样品准备耗时长,不适于大量样品的筛选。本试剂盒是以应用单克隆抗体为基础的ELISA检测方法,可以准确快速检测粮谷类中的T-2毒素。 2 测定原理 本测试盒用固相酶联免疫吸附原理,利用间接竞争ELISA法进行测定。用抗原包被微孔板,加入T-2毒素标准品或样品、抗T-2毒素单克隆抗体进行免疫反应后,将未与包被抗原结合的抗体洗去;再加入酶标记的抗鼠IgG的抗体孵育,加入底物显色,终止液终止后,用酶标仪在450nm处测定OD值。 3 提供的物品 微孔板 5个浓度的T-2标准溶液(各1mL) 标准1:0ng/mL ……………………………………………………………直接使用 标准2:100.0ng/mL ………………………………………………………直接使用 标准3:200.0ng/mL ………………………………………………………直接使用 标准4:500.0ng/mL ………………………………………………………直接使用 标准5:1000.0ng/mL ………………………………………………………直接使用 T-2单克隆抗体溶液(6mL) ………………………………………………………直接使用 酶标物(12mL) …………………………………………………………………直接使用 显色液(12mL) …………………………………………………………………直接使用 终止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用 浓缩洗液(30mL) …………………………………………………………………稀释使用 空白对照(6mL) …………………………………………………………………直接使用 4 盒中未提供,需自备物品 微孔板酶标仪(含450nm)、振荡器、粉碎机、微量移液器 量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸 氯化钠(分析纯)、甲醇(分析纯)、去离子水或蒸馏水 5 操作者注意事项 标准溶液中含有T-2毒素,应特别小心。 终止液为1N硫酸,避免接触皮肤。 每次加样后立即将所有试剂放回2~8 ℃。 每步加样时间应控制在5min内。 孵育过程中应避光。 不要使用过期试剂盒。 不要交叉使用不同批号的试剂盒中的试剂。 6 储存条件 保存试剂盒于2~8℃。不要冷冻 显色液对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。 将不用的微孔板放进原铝箔袋中,置2~8℃保存。 7 试剂变质的标志 标准1的吸光度值小于0.5个单位(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。 8 样品处理 ----样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存; ----取5g粉碎的有代表性的样品,加1.25g氯化钠及25mL 70%甲醇溶液 ----强力振荡3分钟 ----用快速定性滤纸过滤 ----取1mL滤液,用1mL去离子水或蒸馏水稀释 ----取50μL稀释液进行分析 ----*根据需要可以增加样品量,但甲醇溶液的量也应相应增加。 9 酶免疫分析程序 ----浓缩洗液为10倍浓缩液,使用时与去离子水或蒸馏水按体积比1:9稀释后使用。 ----取所需数量的板条插入微孔架,记录样品及标准的位置。 ----加入50mL标准品或处理好的样品到微孔,每个标准和样品必须使用新的吸头。 ----加入50mL抗T-2单克隆抗体使用液到每个微孔(注意移液器管尖不要接触到孔中的液体,避免交叉污染)中,37℃孵育90min。 ----甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板3min×3次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。 ----每孔加入酶标物100mL,37℃孵育60min。 ----用洗液洗涤微孔板3min×3次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。 ----每孔加入显色液100mL(2滴),37℃孵育12-15min。 ----每孔加入终止液50mL(1滴),立即用酶标仪在波长450nm处测定吸光度值(OD值)。 10 样品浓度计算 以标准溶液OD值与标准1OD值的比值为纵坐标,所对应标准溶液浓度(ng/mL)的对数值为横坐标,制作标准曲线。根据样品OD值与标准1OD的比值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为T-2毒素浓度的对数值,求得反对数即为测定液中T-2毒素浓度C(ng/mL),按下列公式计算出样品中T-2毒素含量: T-2毒素含量(mg/kg)= C×K 式中:C:稀释后样品提取液中T-2毒素含量(ng/mL) K:样品稀释倍数(本提取方法为50) 11试剂盒主要技术指标及参数 测试盒最低检出浓度100.0ng/mL,回收率70%-120%,交叉反应系数小于1%,试剂盒校正曲线的线性范围100.0ng/mL -1000.0ng/mL,试剂盒条内变异<10%,条间变异<15%。
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北京智云达科技股份有限公司
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企业类型
信用代码
110108008577096
成立日期
2005-06-23
注册资本
1000
经营范围
技术开发、技术推广、技术转让、技术咨询、技术服务、技术培训(不得面向全国招生);计算机系统服务;计算机维修;销售计算机、软件及辅助设备、电子产品、仪器仪表、通讯设备、五金、交电、化工产品(不含危险化学品及一类易制毒化学品)、汽车零配件、自行开发的产品、汽车、医疗器械Ⅰ、Ⅱ类;委托加工生物制品;企业管理咨询;企业策划;设计、制作、代理广告;货物进出口、代理进出口、技术进出口;技术检测;组装多功能检测仪;销售食品。(企业依法自主选择经营项目,开展经营活动;依法须经批准的项目,经相关部门批准后依批准的内容开展经营活动;不得从事本市产业政策禁止和限制类项目的经营活动。)
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北京市海淀区学院南路68号20号楼601室
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公司名称: 北京智云达科技股份有限公司
公司地址: 北京市海淀区学院南路68号20号楼601室 联系人: 销售经理 邮编: 100081
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