MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱固定相是粒径为3μm、孔径为100Å的硅胶涂敷在新型光学活性体N,N-Dioctyl-L(D)-alanime表面,MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱流动相为硫酸铜水溶液。
MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱的区别如下:CRS10W色谱柱中, D构型化合物先于L构型被洗脱出来, CRS15W色谱柱中,L构型化合物先于D构型化合物被洗脱出来。
MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱不但能分离α-氨基酸,也能分离α-羟基羧酸。
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MCI GEL CRS10W和MCI GEL CRS15W色谱柱使用注意事项:
1、配体固定相和铜离子流动相之间达到平衡需要几个小时。在进样之前或者改变硫酸铜洗脱液的浓度时,建议平衡柱子2-3小时。
2、对于酸性氨基酸,高浓度的硫酸铜洗脱液可以得到更好的分离效果。
3、对弱保留的亲水性氨基酸,降低流速(0.2-0.5ml/min)可增加保留。
4、当样品溶液中氨基酸的浓度高于流动相中硫酸铜的浓度时,连续进样可能会降低峰面积。
5、注意不要同时使用水溶性有机溶剂(乙腈、甲醇等)和非水溶性有机溶剂(正己烷、氯仿等)做流动相,这会对柱子造成不可修复的损伤。要特别注意该柱正反相模式不可更换。
6、不要使用酸或碱溶液调节流动相的pH值。不要使用缓冲液,因为缓冲液会形成沉淀,堵塞柱子。
7、对于强保留的亲水性氨基酸,流动相中添加乙腈或者甲醇可以快速洗脱。有机溶剂的浓度要低于15v/v%。
8、DOPA和其它非极性氨基酸会吸附到柱填料上,污染柱子。
9、污染后的柱子再生很困难。
Examples of chromatographic conditions and data
|
Amino acids |
CuSO4 aq.soln(mM) |
Flow rate(ml/min) |
Retention time L-Isomers(min) |
Separation factor(α) |
Separation rate(Rs) |
1 |
OmHCl |
0.1 |
0.2 |
6.8 |
1.26 |
<1 |
2 |
LysHCl |
0.1 |
0.2 |
7.7 |
1.45 |
<1 |
3 |
Ala |
0.1 |
0.5 |
11.0 |
1.39 |
1.4 |
4 |
HlsHCl |
0.1 |
0.5 |
10.5 |
1.63 |
1.7 |
5 |
Ser |
0.1 |
0.5 |
10.1 |
1.25 |
1.0 |
6 |
Thr |
0.1 |
0.5 |
11.3 |
1.29 |
1.3 |
7 |
Cit |
0.5 |
0.5 |
10.4 |
1.75 |
2.3 |
8 |
Hyp |
1.0 |
0.2 |
23.8 |
1.23 |
1.1 |
9 |
Pro |
1.0 |
1.0 |
7.3 |
2.13 |
4.5 |
10 |
Val |
1.0 |
1.0 |
8.9 |
2.04 |
5.0 |
11 |
Nval |
1.0 |
1.0 |
11.5 |
2.07 |
4.7 |
12 |
Asp |
2.0 |
0.5 |
13.2 |
1.18 |
0.8 |
13 |
Glu |
2.0 |
1.0 |
16.2 |
1.54 |
2.3 |
14 |
Ileu(DL) |
2.0 |
0.5 |
30.4 |
2.14 |
6.5 |
15 |
Ileu(allo) |
2.0 |
0.5 |
21.9 |
1.97 |
6.0 |
16 |
Leu |
2.0 |
1.0 |
14.6 |
1.97 |
4.6 |
17 |
Nleu |
2.0 |
1.0 |
24.1 |
2.16 |
6.5 |
18 |
Met |
2.0 |
1.0 |
10.3 |
1.64 |
2.6 |
19 |
Tyr |
2.0 |
1.0 |
22.5 |
1.85 |
5.3 |
20 |
Eth |
2.0 |
1.0 |
26.4 |
1.69 |
0.5 |
21 |
Phe |
2.0 |
1.0 |
37.8 |
1.84 |
6.3 |
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