【飞诺美色谱】使用 LC-MS/MS 检测 96 孔蛋白沉淀板处理的血浆中普瑞巴林的含量

一、 引言

普瑞巴林是一种新型钙离子通道调节剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释 放。该药是一种新型 γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递 质的释放，临床主要用于治疗外周神经痛以及辅助性治疗局限性部分癫痫发作。 普瑞巴林一般为口服用药，其生物利用率可达到或高于 90%。在血浆中的血药浓度约 0.04 到 9.5 μg/mL

二、 材料与方法 普瑞巴林（pregabalin)，分子式 C8H17NO2 ，分子量 159.23，CAS : 148553-50-8，pKa 4.2 和 10.6。其结构式见图 1。

本实验使用 96 孔蛋白沉淀板对血浆样品进行净化：Cleanert 蛋白沉淀板(Cat:  96CD2025-Q, Spec: 2mL/well, Lot: 150623)，96 位正压装置，96 孔接收板，Venusil MP C18(2) ( 2.1x50mm，5μm，110Å )，以上产品均为天津博纳艾杰尔科技有限公司产品； LC/MS/MS, API 4000+液相色谱-串联质谱仪（SCIEX）。 血浆为牛血浆。 HPLC 条件 色谱柱：Venusil MP C18（2）( 2.1x50mm，5μm，110 Å); 流速：200 μL/min； 柱温：30℃； 进样量：5 μL； 流动相：A-0.1%甲酸水溶液；B-甲醇。

质谱条件 扫描模式：电喷雾电离正模式； 采集模式：多反应监测（MRM）； 电喷雾电压：4500V； 气帘气（curtain gas）：30； 雾化气（gas 1）：60； 辅助气（gas 2）：30； 离子源温度（TEM）：450℃

样品处理方法 蛋白沉淀 1. 将 50 μL 血浆和 50 μL 甲醇/水（1/1）提前混合。然后向 96 孔板中加入 500 μL 甲醇， 再将上面混好的血浆加到孔中，用移液器反复抽吸几次或使用漩涡混合器混合； 2. 使用 SPE-M96 正压装置，调节压力，将液体收集到 96 孔收集板中，3 分钟后停止正 压装置； 3. 向收集板中各孔中加入 400 μL 0.1%甲酸水，混匀，准备检测。

三、 结果与讨论

四、结论 本实验使用蛋白沉淀板对血浆中的普瑞巴林进行了快速提取检测。在 25-100 ng/mL 浓度下， 平均回收率为 96.8%和 95.9%，RSD 值小于 5.05%，可以满足相关的检测需求。