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阈值法检测人用狂犬病疫苗DNA残留量
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简介: 目的:建立一种阈值法( threshold method)检测人用狂犬病疫苗Vero 细胞DNA 残留量的方法。方法:取人用狂犬病疫苗进行DNA 抽提后,与内控品经高温变性、冰浴后,37 ℃水浴 1 h,加入生物素标记的单链 DNA 结合蛋白( single stranded binding pr
简介: 目的:建立一种阈值法( threshold method)检测人用狂犬病疫苗Vero 细胞DNA 残留量的方法。方法:取人用狂犬病疫苗进行DNA 抽提后,与内控品经高温变性、冰浴后,37 ℃水浴 1 h,加入生物素标记的单链 DNA 结合蛋白( single stranded binding protein,SSB)和尿素酶标记的抗单链 DNA ( single stranded DNA,ssDNA)的单抗,与变性的宿主细胞DNA 结合形成复合物,经过滤、洗涤后,将复合物吸附于硝酸纤维素膜上,置Threshold 仪器样品检测池中,检测DNA含量。对建立的阈值法测定人用狂犬病疫苗Vero 细胞DNA残留量的方法进行线性范围、准确性及精密度验证。结果 该方法的最低检测限为 3 pg / 500 μl,线性范围为 3 ~ 200 pg / 500 μl,DNA 内控品浓度的对数与相应的检测信号值的对数呈良好的线性关系( R2 = 0. 98);该方法检测不同企业疫苗样品的回收率为 99% ~ 124%,变异系数为8. 5%,加入内控品后再抽提,不同企业疫苗样品的回收率为 48% ~ 128%,变异系数为 32. 9%;同1 批疫苗重复10次的检测结果的CV值为 7. 8%,同 1 批疫苗不同时间检测结果的 CV 值为 11. 8%。 结论:阈值法可检测人用狂犬病疫苗Vero 细胞宿主DNA 残留量,该方法操作简便,灵敏度好,准确性及精密度高,对人用狂犬病疫苗生产和质量控制具有较好的指导意义。
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