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大鼠 1,25-二 D3(1,25-(OH)2D3)酶联免疫分析ELISA试剂盒 下载
大鼠 1,25-二 D3(1,25-(OH)2D3)酶联免疫分析ELISA试剂盒
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简介:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠1,25-二平。用纯化的大鼠 1,25-(OH)2D3 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 1,25-(OH)2D3,再与 HRP标记的1,25-(OH)2D3抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体D3(1,25-(OH)2D3)复合物,
简介:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠1,25-二平。用纯化的大鼠 1,25-(OH)2D3 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 1,25-(OH)2D3,再与 HRP标记的1,25-(OH)2D3抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体D3(1,25-(OH)2D3)复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸 的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 1,25-(OH)2D3 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠 1,25-二 D3(1,25-(OH)2D3)浓度。 试剂盒组成: 试剂盒组成 说明书 48孔配 1份 96孔配 1份 保存 封板膜 2片(48) 1个 2片(96) 1个 密封袋 酶标包被板 标准品:90ng/L 标准品稀释液 酶标试剂 样品稀释液 显色剂 A液 显色剂 B液 终止液 1×48 1×96 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 0.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3ml×1瓶 (20ml×20倍)×1瓶 0.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6ml×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 浓 样本处理及要 : 1. 血清:室温血液自然凝固 10-20分钟,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如出现 ,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有 ,应该再次 离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程 ,应再次离心。胸腹 、脑脊液参照实行。 中如有 4. 细胞培养上清:检测分 ,用无菌管收集。离心 20分钟左右(2000-3000转/ 1分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有,应再次离心。 5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液 用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待 检测,其余冷冻备用。 6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 7.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过 (HRP)活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10孔,在第一、第二孔中分别加标 准品 100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从第一孔、第二 孔中各取 100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl, 混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl弃掉,再各取 50μl分别加到第五、第六孔 中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各 取 50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混 匀后从第七、第八孔中分别取 50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准 品稀释液 50μl,混匀后从第九第十孔中各取 50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为 50μl, 浓度分别为 60ng/L,40ng/L,20ng/L,10ng/L,5ng/L)。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
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