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共有 12 人回复了该问答如何在梯度洗脱中让人参皂苷出峰时间提前(已重新更新)
 回复txm发表于:2007/8/17 16:08:00悬赏金额:38积分 状态:已解决
2005版《中国药典》采用HPLC法测定了人参皂苷Rb3的含量,色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。以乙腈为流动相A,以0。2%磷酸溶液为流动相B,按下式进行梯度洗脱,检测波长为203nm。...

0~19分钟:流动相A(%):30→35;流动相B(%):70→65
19~21分钟:流动相A(%):35→60;流动相B(%):65→40
21~26分钟:流动相A(%):50;流动相B(%):50


做出来的图谱如下

  图一:人参皂苷Rb3    图二:供试品

请问该如何调整流动相比例或者采用什么办法使其出峰提前,而不至于出现在坡形上???











非常感谢大家的热心帮助,综合了大家的参考意见,并经过几次流动相比例的摸索调整,出峰时间已经提前了,但还是出现了连峰分离度不好的情况,请大家再看看在这段出峰时间如何再调整比例,使峰分离得更好,谢谢!!!
0~10分钟:流动相A(%):30→35;流动相B(%):70→65
10~21分钟:流动相A(%):35→50;流动相B(%):65→50
21~26分钟:流动相A(%):50;流动相B(%):50

miaoweili 回复于:2007/8/21 21:52:00
流动相极性调大一点
ljd5210 回复于:2007/8/29 19:44:00
用岛津的UFLC,超快速高效液相色谱仪
case06 回复于:2007/8/27 15:48:00
没做过啊,爱莫能助啊!
163xin 回复于:2007/8/21 14:16:00
样品杂质峰太多,分离效果也不太理想,建议换根小微米的柱子试试。
easyboy 回复于:2007/8/21 8:13:00
原文由 yaya91 发表:
只要分离度达到1.5以上,就可以了.从图谱上看,样品的主成分峰峰形与对照品一致,条件是合适的。假如峰提前,会导致与相关杂质分不开。

是啊,你可以用溶剂走一个空白,然后减去空白图谱,就能够获得基线较平整的图谱了。如果是Waters的仪器。
 回复  1# wubaicang2003  回复于:2007/8/18 9:19:00
把水重新蒸馏一下,再重配流动相;在正式做样之前最好不进样就走一个空梯度让系统充分饱和,设定梯度时最后让流动相配比回归到起始比例,你的问题应该能够解决
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