回复ruojun发表于：2007/6/21 10:39:00悬赏金额：
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已解决
您在使用酶标仪时,可能发生过很多问题,分享一下吧.
ELISA使用过程中的问题与分析这是从其他资料复制的.
帖子我结了，但还是有很多问题期待大家继续讨论。
原文由 ruojun 发表:
方法是有一个固定的反应时间为30分钟,洗板后再加入成色底物反应30分钟,最后终止反应比色读数.这些过程都一样,唯一的差异是在室温的回温时间和做实验的时间:上午或下午.难道上午或下午温度不同也会导致这么大的吸光度差异? |
如果连上午和下午都差这么多，这个实验的系统适用性就有问题。
没有其他公司的产品吗？如果有可以试试，不排除试剂盒本身的不稳定性。
原文由 menghandna 发表:
不超过24小时？时间很长，不知道有没有封口，最好不要直接与空气接触。 |
原文由 ruojun 发表:
试剂会接触空气的,但板井我都放在空气中了.时间从30分钟到3小时不等.错了,要封口呀?温度太低应该会影响抗原抗体吸附吧 |
1、温度低会影响抗原抗体反应的，一般是在37度反应一个固定时间，也有用室温（20度附近）反应一个固定时间（这些时间由自己掌握，固定就行）。
2、板子在不用的情况下，要密封起来，特别是长时间保存，不能让板子完全干透了，会影响将来的抗原抗体的结合。
3、最后酶显色也是很重要的，如果这时的条件不能一致，波动也会增加的；同样也是保持条件一定。
4、一直没有注意到板子回到室温的时间，没注意到它的干扰，只是注意反应的温度与时间：一般是把试剂回复到室温（用手感觉一下）再加试剂，然后再加样/试剂去反应（室温或37度保温）。
原文由 dhm7801 发表:
我只用酶标仪做黄曲霉毒素，那也是要低温的，我一般放在室温中45分钟即开始做实验，只是实验不怎么能再读第二遍，第二遍的数据有差别，所以我想可能和反应的速度有很大的关系。 |
那这样的实验结果可靠吗？实验的重复性，重现性如何？
我只用酶标仪做黄曲霉毒素，那也是要低温的，我一般放在室温中45分钟即开始做实验，只是实验不怎么能再读第二遍，第二遍的数据有差别，所以我想可能和反应的速度有很大的关系。
原文由 ruojun 发表:
我分析的是三聚氰胺。试剂盒要求在低温下保存。使用前在室温下回温后再用。但厂家没有告诉回温时间。所以为快速检测，有时回温时间偏短，有时较长，但总体看回温时间短吸光度低很多，如果读数推迟时，吸光度会在一定时间内逐步增加；相反，如果回温时间长，推迟读数时间，很快吸光度降低。当然，吸光度与浓度的关系仍然明显。 |
应该做回温时间和吸光度的关系考察，找到变化稳定的时间或影响最小的时间才好，否则系统的误差太大了。没有用过，个人观点，不知对否？
menghandna 回复于：2007/6/26 9:10:00
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