原文由 biotrandglobal 发表: 要做免疫球蛋白的非还原性SDS-PAGE，需要注意什么？ 1、想用6%的分离胶，4.2%的浓缩胶，是否可以？ 2、样品处理缓冲液，与通常的还原性上样缓冲液不一样的就是不加DTT或巯基乙醇，对吗？ 3、电泳时的电压是否要小些，以减少产热，但长时间电泳，是否会破坏胶（6%已经很软了）？ 4、现在我用的丙烯酰胺的C值为3%（0.9g双叉丙烯酰胺加29.1g丙烯酰胺）是否合适，特别是对于这种低交联度的凝胶是否合适，是否要修改C值？ 5、将来染色时能否用热的染色液，或者在微波炉中加热？（我们现在12%或15%的胶是在热的染色液中染色的。）

1、免役球蛋白的分子量一般为15万左右，选用6%的分离胶，4.2%的浓缩胶原则上是可行的，但是6%的分离胶在实际操作中太软，不好操作，尤其是剥离的时候一定要小心。
2、理解是对的。还原型和非还原型的区别就在于样品缓冲液，前者含有一定量的还原剂，常用的为DTT或巯基乙醇。
3、电泳时的电压小一点，对电泳是有利的，但是也是相对的。因为电压小电泳时间相对长，还是要产热。如果胶薄一些，如0.75MM的厚度，有利于散热。
4、C值为3%是常用的，不同的C值分离度不同，一般认为2.67%的分离效果最好。
5、用热的染色液染色能加快染色速度，但是一定要注意温度不要超过60度，一般如果时间允许，不建议采用加热的方法。尤其是要避免用微波炉加热，这个温度是很难控制的。