水果、茶叶、食用菌中57种农残检测实验问题总结

一、实验前处理方面的问题

食用菌前处理方法举例。

（1）称取10g样品于50mL离心管中，（加完标后是否需要放置过夜使其充分吸收还是直接进行样品处理？）加入20mL乙腈，均质15000r/min，匀浆

1min，加入5g氯化钠，匀浆1min，3000r/min离心5min，取上清10mL，待净化；

◆在取上清液时，蔬菜水果和食用菌的方法都有固定的取样体积，但茶叶方法中没有明说取多少，且匀浆离心后的上层液浑浊，表面漂有渣滓，后经商讨取的是偏中间的液体，未取完上层液。

（2）用10mL乙腈预洗ENvi-18柱，下接鸡心瓶，将样品过柱，并用15mL乙腈洗涤柱，收集液40度水浴旋蒸浓缩至约1mL，备用。

（3）在Envi-Carb柱中加入2cm高无水硫酸钠，连接至Sep-Pak氨丙基柱顶部，下接鸡心瓶；

◆ 无水硫酸钠应是加一个柱过一个柱，我们是都加好了再一起过柱，这样其他柱中的无水硫酸钠长时间暴露在空气中，会影响它的吸水效果.

（4）先用4mL乙腈-甲苯（3+1）预洗至润透硫酸钠时，迅速加样，再用2mL乙腈-甲苯溶液三次洗涤样品瓶并转移至柱中；

◆用乙腈-甲苯溶液洗涤样品瓶时我们应用漩涡混匀仪对鸡心瓶中接触过的样品的部分进行充分的洗涤，而不是手摇荡洗了事。

（5）在柱上加50mL贮液器，用25mL乙腈-甲苯溶液洗涤串联柱，收集液于40度水浴旋蒸浓缩至0.5mL。

◆这一步有不少问题。首先是贮液器的问题，这个贮液器虽然我们没有，但也不是特别需要，以后有强需了可以再考虑；然后是过柱装置的问题，我们的固相萃取装置仅适用于15mL的离心管，因为这次需要用到鸡心瓶，显然是放不进固相萃取装置的，所以我们只好把柱子搭在鸡心瓶瓶口，用架子固定鸡心瓶进行过柱。

◆最后是过柱流速控制的问题，若不控制流速，样液和洗涤液快的几分钟就过完了，这样过完柱的样液和过柱前的样液区别不大。因为在茶叶的样液过柱时，虽然部分样液过完柱是透明的，但也有部分样液过完柱后仍是黄绿色的，之后浓缩时还会出现油性物质，所以无论什么情况下，在过柱时我们都应该考虑过柱流速控制的问题。我们下次就可以考虑利用固相萃取装置配套的活塞流液口来控制流速，使样液和洗涤液在填料中充分浸泡除杂后再流出。

（6）加入5mL正己烷在40度水浴旋蒸蒸发，进行溶剂交换两次，最后使样品溶液体积约为1mL，加入40μL内标，混匀待测。

◆ 刚开始旋蒸时，旋蒸一个样品需要25分钟，之后越来越慢，慢至1小时才能蒸完一个。次日再旋蒸时，旋蒸一个样品的速度又恢复25分钟一个了。这个问题上一次长时间旋蒸时也出现过，但仍未解决。

◆ 最后一步我们修改了操作：在加入5mL正己烷，进行第一次溶剂交换前，旋蒸至2mL左右，再转移至10mL带刻度的离心管中。把第一次溶剂交换用的5mL正己烷来分次洗涤鸡心瓶，洗涤液并入离心管中，用氮吹浓缩至约1mL后，再把第二次溶剂交换用的5mL正己烷加到离心管中，浓缩至约1mL，加上内标后待测。实际上我们在这氮吹浓缩中，将样品浓缩到了离心管1mL的刻度线下，再用正己烷在离心管中定容至1mL刻度线，最后再用1mL的注射器配合有机相针孔滤器将离心管中的样液转移至进样瓶中，但因为注射器一次取不完样液，分次取了后就损失了一些样液，所以实际操作中，定容和转移这步是存在问题，需要讨论解决的。

[img=57种农残种类及定量限,690,507]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/04/202104161123284722_6185_3490514_3.png!w690x507.jpg[/img]

二、仪器数据处理方面的问题

1 批处理方法的建立

定量数据处理时都需要先建一个批处理方法。每次检测的农残数量多时，在建批处理方法这一步就要花很多时间。即使是用同一批农残，前后做了两次实验，不同的标曲，也要建两个不同的批处理方法，批处理方法还不能通用于这两个实验，这就更耗时间了。这个问题可以考虑有没有其他可以节省批处理方法建立的时间。

2 建立批处理方法时的定量、定性离子的选择

选择化合物的定量离子有两种方法，一是通过筛选批处理自动检索出的离子，二是手动在色谱图中选中对应的色谱峰定量离子。第一种方法的好处是比较客观，也省去了找离子的步骤，坏处是在两个相同的离子中，只会出现RT较早的离子，这样容易找不到离子；第二种方法的好处是能找全所有的离子，坏处是主观性太强。在色谱峰明显且响应较高的化合物中选择峰高处的离子就好，但遇到响应不高的化合物时，就不好选择定量离子了，也会出现定量离子的质荷比比定性离子的质荷比低的情况。定量离子是否选得合适，定性离子质荷比是否和标准相近，这两点是会影响样品能否按照定量标准处理或是否能找到对应的定性离子进行正确的数据处理。

3 标准曲线每个点的选择

在定量数据处理软件上，是可以选择使用标准曲线上哪些点的，所以当标曲数据与预设标曲数据不匹配时，可以通过取消使用不匹配的标曲点，使整条标曲数据接近预设的标曲数据，这样处理出的数据也是较合理的。

4 整个实验操作流程加标方法及57种农残的回收率，见附件