我做的是样品中的黄酮定性定量，试了许多文献的方法，只有芦丁出峰，但按理说应该还有槲皮素、山奈酚等等，一个是因为其他品种的样品有，另一个是总黄酮含量大小和芦丁含量大小不一致。

在我尝试了浓缩、纯化、酸水解都不行之后，我开始摸索液相条件

我看了社区的一些精华帖，选定了0-48min，5%-95%乙腈（另一个是1%乙酸），打算先测一下进样体积和流速的影响，结果发现在这个梯度下，无论怎么换别的，只有两分钟左右的溶剂峰，其余一个峰都没有。

所以，我觉得可能得用分段的梯度，但是这个分段怎么分，每一段的流动相占比我不知道该怎么设置，于是就胡乱设置了一下。

比如48min平分成六段，一段8分钟，让乙腈从5%开始往上升，升到100%，再走一个初始比例。

我想问的是：

1. 我上面的思路是对的吗？

2. 大家知道梯度怎么分段设置吗？

3. 有的方法混标跑的很好，槲皮素那些都能出峰，但是样品就是不出槲皮素的峰，这是不是说明我样品里就是没有这些东西？

4. 我现在尝试分析别人的梯度，比如他们的槲皮素8分钟出峰，而梯度是0-10min，30-40%乙腈，这能不能说明，（40-30）/10*8+30=38，38%的乙腈可以洗脱槲皮素，我应该用38%左右的乙腈多走一会？