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共有 3 人回复了该问答液相同时在UV和RID下检测6种有机酸和果糖葡萄糖,方法优化问题求助!
 回复Ins_04bca4d2发表于:2020/9/26 10:16:26悬赏金额:19积分 状态:未解决
目标待测物为:柠檬酸、酒石酸、葡萄糖、苹果酸、果糖、琥珀酸、乳酸、乙酸(该顺序也为出峰顺序)
检测方法为:样品预处理 取 1.5 mL 泡菜水,在 10000 rpm 转速下离心 15min 去除泡菜水中的悬浮 颗粒,用注射器吸取上清液 1 mL 通过 0.22 μm 微孔滤膜,然后将滤液转入 HPLC 的进样瓶中,并放入自动进样盘进行有机酸的 HPLC 分析。 (2)色谱条件 色谱柱 Agilent ZORBAX-SB C18(4.6 mm×250 mm 5 μm),检测器为RID 和UV联用,流动相为 95% 的磷酸缓冲液(0.01 mol/L)和 5%的甲醇,流速为 1 mL/min,检测波长 UV 210 nm,柱温为室温。
下图为另一仪器上检测出的保留时间,跟我之后图中时间略有差异,基本一致
[img=,690,453]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909261002106494_3561_4008596_3.jpeg!w690x453.jpg[/img]
该图为紫外下检测出的六种有机酸标曲,八叉后面六个即是目标物
[img=,690,636]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909261002278314_1702_4008596_3.jpeg!w690x636.jpg[/img]
该图为RID条件下检测的糖类标曲,目标物已标出
[img=,690,607]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909261002224364_5902_4008596_3.jpeg!w690x607.jpg[/img]
该图仍为6种有机酸的标曲基线和分离情况
[img=,690,644]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909261002332784_1583_4008596_3.jpeg!w690x644.jpg[/img]
该图为RID下样品图,两个糖都没出峰
[img=,690,718]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909261002422274_7213_4008596_3.jpeg!w690x718.jpg[/img]
该图为UV下样品图,6种酸都出峰,圆圈是第一个目标峰,分离情况如图
[img=,690,748]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909261002460814_9803_4008596_3.jpeg!w690x748.jpg[/img]
该图为另一台仪器,另一根柱子,相同条件下的6种有机酸样品图
[img=,690,425]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909261010234214_2264_4008596_3.jpeg!w690x425.jpg[/img]
我的几个问题是:
1、RID下糖的标曲没分开,如何优化两种目标糖类?
2、UV下有机酸的基线和峰形还是不够好,如何优化?
3、样品糖没测出来,是否方法问题很大,或者柱子、流动相等其他问题很大?样品酸是否还能更好分离?
4、同检测方法,不同仪器和柱子,酸的样品差距很大,是否最后一张图种柱子不合适的可能性最大?更换柱子是否能最大程度改善问题?
5、有同事推荐我用ELSD试试同时测这几种,理论是否可行?(因我实验室无仪器,需理论支持可行度高,再去找老板沟通找仪器)
 回复  1# hujiangtao  回复于:2020-09-26 10:38:26
糖和酸一起检测难度比较大
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