回复dlleap发表于:2020/9/5 16:10:39悬赏金额:
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未解决
本人凝胶色谱新手,在做一个项目,需要用凝胶色谱。美国药典论坛上已有方法,重复了人家方法发现有些地方不对,撇开这些不谈,先说说我的疑问吧!
1 美国药典上的流动相加了0.1M的硝酸钾,我试了一针加的,一针不加的,发现不加盐峰会前沿,加盐的峰很对称,请问在凝胶色谱里加盐的目的除了改善峰形还有什么作用吗?我更好奇的是盐是通过什么原理来改善峰形的?
2 还有一个很奇怪的现象,我的样品和两个杂质出峰时间重叠,即专属性不合格,这三种物质虽然都是钠盐,但大家请注意样品的分子量范围是1000-2000,而两个杂质的分子量一个是100多,一个是300多,就是说在分离原理为分子排阻的凝胶色谱里,分子量1000多的和100,300的一起出峰,改变流动相(换过纯水,也试过加大有机相比例)变化并不明显,这是为什么呢?难道现在的凝胶色谱已经不是单纯的分子排阻原理了,还是说样品的出峰时间除了和分子量有关,还和他们的水溶性有关?
这两个问题快把我折磨疯了,请高手解答!