对于波长的确定，可以先进行全波长扫描。利用仪器的二极管阵列检测器等功能，对样品进行不同波长下的扫描，观察样品在不同波长下的吸收情况。通常会选择样品在某个波长下有较强吸收且干扰较小的波长作为最佳波长。可以多尝试几个不同的波长范围进行扫描，对比结果来确定相对较好的波长。
对于流动相的选择，可以先从一些常用的流动相体系开始尝试。比如甲醇 - 水、乙腈 - 水等不同比例的组合。通过改变流动相的比例、pH 值等条件，观察样品的分离效果和峰形。可以进行梯度洗脱的尝试，以找到能够较好地分离样品中各组分的流动相条件。同时，也可以参考类似结构化合物的分析方法，借鉴其流动相选择的经验。
在实验过程中，要注意记录不同条件下的结果，不断调整和优化，逐步找到最适合这个未知样品的波长和流动相。