用的中压柱，内径22mm，长50cm，耐压10bar，填料是sephadex LH20，流动相是甲醇和水，梯度是100%水，20%甲醇，40%甲醇，60%甲醇，80%甲醇，100%甲醇。开始100%水冲柱子的时候，压力大约在4bar左右，但是随着甲醇增加，梯度逐渐变大，最后100%甲醇时候，超过了15bar，柱子开始漏液了。开始我流速设置的0.5ml/min，最后压力到了11bar，后来我把流速改到了0.3ml/min，最后压力反而超过了15bar。这究竟是怎么回事？
上样之前我用各个恒梯度都试过的，压力都不超过8bar，谁知道一跑样就超了。