回复wmh820312发表于:2020/7/29 15:07:42悬赏金额:
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未解决
我是将买来的纯品直接溶于0.5 mL ACN:0.1% NH4OH(看文献基本都是溶于碱性条件,并且碱性条件下分离和检测),得到1 mg/mL的储备液,-20℃保存。测样前,用相同的溶剂稀释到10 ug/mL。我用的仪器是Agilent LC-ESI MS/MS,液相是1200系列,质谱是6460 Triple Quad MS/MS。流动相分别是:A:0.1% NH4OH,B:ACN。自动进样器后不经过柱子直接进质谱,10 ug/mL的标样在全扫描模式下得到的质谱图如附件所示,属于该蛋白的带3个、4个、5个和6个电荷的都是出现成簇的峰,例如带4个和5个电荷的离子,即1129.2和903.8,分别是相差5.5和4.4的一系列峰,我现在推测是加钠的峰。是因为在碱性条件下测所以会出现这么强的加钠峰吗?我试过在酸性条件下,加钠现象会很大程度上减弱,但是这个蛋白在酸性条件下溶解得不好,灵敏度也没有提高。我看文献上MRM模式下测这种蛋白检测限能达到1ng/mL左右,而我现在的检测限也就几百ng/mL,不知道是不是加钠现象严重影响了检测灵敏度。或者是我溶解、保存的条件不恰当,导致聚集体产生,而使灵敏度这么低。
全扫描的质谱图请见附图。
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