回复nathanbird发表于：2006/12/13 21:48:00悬赏金额：
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我使用的supelco LC-NH2柱，使用正己烷和异丙醇为流动相，分离测定壬基酚类物质的同系物，之前的标线还很好，柱子也还算稳定，分离效果也不错。但昨天突然就不出峰了，而且原来可以出峰的标样也不出峰了。
后来仔细观察，好像是出峰时间晚了很久，大约10分钟左右，所以看上去像不出峰了。
昨天的柱子是在大约1个月没有使用后重新开始使用的，又洗了很久，而且是换相用乙腈/水洗的。洗好后，换成正相后，第一个标样出峰正常，因为是梯度洗脱，所以柱压从开始的43bar升到了200多bar，但还是重新稳定在了38bar。但之后同样的梯度洗脱程序，柱压不变化了，出的峰也越来越少。
我是新人，请高手帮我看看，可能原因是什么？是柱子不行了吗？可我从买来到现在一共做过的样才不到二十个。还是其他什么原因？这方面有没有什么经验可以分享。
谢谢，盼复。
wzl-x 回复于：2006/12/14 13:03:00个人认为是你的流动相没有平衡好柱子
你用乙腈和水洗完以后,就直接上的流动相么?
建议你用异丙醇把柱子用0.1ml/min流速好好冲洗,一晚上吧!
原文由 nathanbird 发表:
我使用的supelco LC-NH2柱，使用正己烷和异丙醇为流动相，分离测定壬基酚类物质的同系物，之前的标线还很好，柱子也还算稳定，分离效果也不错。但昨天突然就不出峰了，而且原来可以出峰的标样也不出峰了。
后来仔细观察，好像是出峰时间晚了很久，大约10分钟左右，所以看上去像不出峰了。
昨天的柱子是在大约1个月没有使用后重新开始使用的，又洗了很久，而且是换相用乙腈/水洗的。洗好后，换成正相后，第一个标样出峰正常，因为是梯度洗脱，所以柱压从开始的43bar升到了200多bar，但还是重新稳定在了38bar。但之后同样的梯度洗脱程序，柱压不变化了，出的峰也越来越少。
我是新人，请高手帮我看看，可能原因是什么？是柱子不行了吗？可我从买来到现在一共做过的样才不到二十个。还是其他什么原因？这方面有没有什么经验可以分享。 |
没有用过你这种柱子，鉴与你所说的，我提几点建议：
1、你用了正己烷、异丙醇、乙腈和水四种溶剂，其中正己烷与后两种（乙腈和水）是不互溶的，建议你用异丙醇把柱子好好平衡过度，然后再进行梯度洗脱。
用异丙醇时注意：异丙醇的黏度大，反压会很大的，需要用低流速来处理。
2、如果反压到了200多bar，是否已经过了柱子的耐受？重新稳定在38bar，比之前的43少了近5bar，也不少了，再检查一下管道是否有漏夜的。
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