各位朋友好，现在我用液相分离一个多肽样品，但是我自己摸索的方法现在出现一个问题就是同一样品连续进样主峰的峰面积会慢慢增大，第一针峰面积16500，第二针就是16580，第三针16670，每次进样峰面积都增加50到100不等，无法做重复性实验了。
我用的流动相是A：95%水+5%ACN+0.1%TFA；流动相B：90%ACN+10%水+0.1%TFA，柱子用的是C18的柱子，我是从0min开始到30min用梯度洗脱，后面用流动相B冲洗10min，然后回到初始条件平衡10min，然后 开始走下一针样品；
出峰时间没有太大变化，只有0.02min的浮动；
一开始以为是柱温的问题呢，后来试过了20，30,40,50度这几个发现都一样，还是不断增大；
仪器没问题，因为前面用不同的方法走其他的样品的时候重复性是很好的；
我在这个条件的基础上增大梯度的陡度或者开始进样的时候增加一个等度平衡体系发现都没有什么用，峰面积依然逐渐增大；
我开始以为柱子的问题，然后换成C8的柱子，用这个方法走同样的样品依然是这样的情况；
请教一下有经验的朋友这是不是我的洗脱条件的问题，是否需要更换流动相或者说更换梯度的比例，如果是的话应该从哪儿来入手找到问题的所在，谢谢！