最近在用欧洲药典EP8.0的方法检测维生素K1原料的有关物质，可是色谱条件无法重现，不知道该怎么处理了。
色谱条件：硅胶色谱柱250cm*4.6mm，5μm；
流动相：正辛醇：异丙醚：正庚烷=2:6.6:2000，流速：0.8ml/min
检测波长：254nm；流动相至少冲24小时，进样量：50μl。
精密量取溶液（b）、（c）注入液相色谱仪，记录色谱图至反式异构体保留的1.6倍（保留时间约30分钟）；反式-环氧化物峰相对保留时间约为0.6，顺式异构体峰相对保留时间约为0.65；试验了色谱柱 ，都不可以。
| Agilent ZORBAX RX-Sil 5μm，250*4.6mm |
| GRACE Alltima silica 5μm，250*4.6 |
调整过流动相比例，都不可以
| 正辛醇：异丙醚：正庚烷=2.2:6.6:2000 |
| 正辛醇：异丙醚：正庚烷=2.0:7.3:2000 |
结果均是
| 峰名称 | | 相对保留时间 | 系统适用性中规定的相对保留时间 |
| 顺式异构体 | | 0.83 | 0.65 |
| 反式环氧化物 | | 0.97 | 0.6 |
| 反式异构体 | | 1 | 1 |
出峰顺序，求大侠指点。
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