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共有 17 人回复了该问答还原CE-SDS
 回复v3058381发表于:2020/5/16 15:00:08悬赏金额:10积分 状态:未解决
各位亲,求助!

最近在做还原CE-SDS的过程中,单抗的重链出现裂峰,具体情况见图片。反应体系就是根据Beckmen的试剂盒来的,调整过样品盐浓度,更换过Sample Buffer,毛细管和处理温度,但问题依然存在。样品拿到别的公司去做,结果也是一样的。但奇怪的是,去年同样条件却没有发生这种状况。

后来用酶切了一下样品,发现重链提前到了原来的非糖基化重链位置,但峰形完全正常了,具体见图片。

请问:是否样品的结构本身发生了变化?还是我在处理样品过程中导致其发生变化?如果是我处理的问题,应当如何改善?

求各位大神不吝赐教,万分感谢![img=,690,352]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/05/201605161458_593523_3058381_3.jpg[/img]
 回复  1# v2812644  回复于:2020-05-17 11:46:08
你的酶切是切糖吧,就是说重链的糖都被切掉了,所以会前移到NGHC的位置。
对于常规实验里HC分裂的情况,我们一般认为是由于毛细管没完全处理好造成的,建议使用1M NaOH冲洗10min后重新precondition.
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