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共有 20 人回复了该问答药典内标法的计算问题
 回复haironglove发表于:2016/4/7 17:53:19悬赏金额:50积分 状态:未解决
各位专家,本人最近在做铁皮石斛的甘露糖的测定,十分困惑于其计算方法。在忽略实验操作问题的情况下,就我的数据计算过程,请求各位专家指出我的计算过程是否有问题非常感谢!
方法严格参照药典。
样品称样量为0.1200g,
内标,D-盐酸氨基葡萄糖的配制方法:称取121.0mg,用水定容到10ml,浓度为12.1mg/ml。
甘露糖的配制法:称10mgD-甘露糖,加内标溶液1ml,用水定容到100ml,浓度为0.100mg/ml。
其它步骤均严格按照药典。
经上机进样10微升测得校正因子:D盐酸氨基葡萄糖峰面积:A内=3242.9,甘露糖的峰面积A甘=2581.8,色谱图上图
样品进样10微升得:D盐酸氨基葡萄糖峰面积为2677,甘露糖的峰面积为5406.3。色谱图下图

以下是结果计算:
计算方法一:

校正因子:f=(3242.9/12.1)/(2581.8/10)=1.0381(个人理解为质量而非药典中所指的浓度,因为峰面积是和具体进样到仪器内的质量相关。即100ml标样溶液中的甘露糖质量为10mg,内标盐酸氨基葡萄糖质量为12.1mg)
样品中甘露糖的含量=1.0381×5406.3/(2677/24.2)=50.735mg(个人理解为在煎煮的约100ml的水溶液中的盐酸氨基葡萄糖加了2ml,质量为24.2mg,而这约100ml的煎煮水溶液中甘露糖的质量就是我要计算的值)
则药材中甘露糖的含量为50.735mg×0.1/0.1200g=42.28%
计算方法二:个人感觉和方法一并没有本质的不同。
校正因子 f=(3242.9/0.121)/(2581.8/0.1)=1.0381
样品中甘露糖的浓度=1.0381×5406.3/(2677/0.242)=0.50735mg/ml,由于这里加了2ml内标,方法中又没有对煎煮的100ml进行定容。这里的内标浓度0.242mg/ml是以100ml的体积来估算的。则溶液中甘露糖的总量=0.50735×100=50.735mg,这两步计算中可以约掉体积的因素,因此药材中甘露糖的含量为50.735mg×0.1/0.1200g=42.28%
以上两种是我的计算方法,我的困惑就是以上的计算完全忽略了水解过程对样品的稀释,因为参与水解的样品是1ml,最后的水解液加了酸碱是约2ml,这可能也是为什么在样品中加入2ml内标的原因,这相当于样品被稀释了一倍。但是这个稀释过程并没有在以上的计算中体现出来。可是我测的是水解稀释后的样品呀,因为涉及到调节pH,因此这个稀释的倍数也应该不是准确的,这个如何是好?。
求问各位专家,我上面的计算有什么问题吗?如果没有问题,怎么解释水解稀释的过程?如果有问题,可否将详细的计算步骤列出来为我解惑呢?脑袋疼,求解惑!非常感谢!!!!
 回复  1# bingwang228  回复于:2016/4/8 11:49:17
调节pH值的盐酸和氢氧化钠的浓度一样,因此调节到中性时应该是稀释了一倍,而且用到内标,所以就不用考虑这个稀释倍数了
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