最近在做一个中性单抗的cIEF方法，用的是贝克曼PA800plus。在对标准品进行分析的时候发现，不同时间检测的结果，各峰的相对丰度会有变化，最高峰有时候是第二个，有时候是第四个。样品、仪器、人员、缓冲体系等条件都是一样的。各峰的pI值也很稳定。这种情况是正常的吗，这样的结果很不利于对各峰制定标准，不知道大家都是怎么做的？
我采用的方法和体系基本都与贝克曼提供的一致，尿素浓度采用6M，聚焦时间是12.5min.对聚焦时间进行过优化，分别考察了10min，12.5min，15min，17.5min和20min，除了10min分离度不好外，其他结果图谱基本一致，考虑到节省时间选了12.5min。最近对结果进行分析的时候，发现各时间的电流图有点差异。聚焦结束时，17.5min电流降到最低大概1.5uA，15min 大概1.6uA，而12.5min大概1.7，1.8uA这样。
是不是我选择的聚焦时间不够导致了相对丰度会有变化？如何判断聚焦时间，是电流降到最低表示聚焦充分吗？
急等大神回答