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共有 5 人回复了该问答关于凝胶色谱(GPC)在HPLC仪器上应用的方法可行性讨论
 回复v2927546发表于:2015/12/22 8:29:31悬赏金额:50积分 状态:未解决
各位朋友们,我的课题是分离检测陈酿红酒中的聚合色素。在色素检测的领域,常规的是HPLC(MS),采用C18反相色谱。但只是对单体花色苷和寡聚花色苷有好的效果。聚合度提升(花色苷,黄酮类物质的互相聚合物)导致色谱分离效果下降,显示出的是一大块不能分开的大峰(hump)。这是现在问题的瓶颈所在。因为聚合色素的分子量一般都在1000以上,所以想试一试凝胶色谱的分子筛效应筛选,但是我之前没有做过分子筛,对之很不熟悉。所以想请各路朋友探讨一下方法的可行性。下面是我针对凝胶色谱的几个疑问,希望有经验的朋友帮我解答:、1,凝胶色谱是一个配备有特殊检测器和别的装置的大型仪器吗?还是只是色谱柱是凝胶色谱柱?如果将HPLC(MS)的色谱柱更换为凝胶色谱柱,是不是就达到了凝胶分离的效果,操作上可不可行?2,因为聚合色素的结构复杂,同分异构体也会很多,我自认将其每个分离纯化出来都是不可能的工作。而且,因为凝胶色谱的分离只能达到将不同水力半径的物质分离的目的所以,其最终的分离效果如何仍然未知,望有经验的朋友指点一二,不胜感激!3,我认为,聚合色素分离的关键在于色谱柱,只有符合聚合色素物理化学特性的色谱柱才能解决分析检测的能力。希望有详细介绍和讲解色谱柱技术的朋友不吝分享一下资源,万分感激!
 回复  1# 540019326qq  回复于:2015/12/22 10:36:37
    凝胶色谱原理其实和LC类似,用来测定其分子量,只是其分离原理和一般的LC不太一样;由于凝胶色谱的色谱柱不是常规C18柱,填料是树脂或者凝胶,其分离原理:与色谱柱填料孔径和样品分子大小相关,根据样品的分子大小进行分离,因此,大粒径的分子先出峰,小粒径的分子后出峰。
    一般凝胶色谱的检测器是示差折光检测器,色谱图横坐标是出峰时间,众坐标是样品响应强度(与样品浓度/含量有关);一般凝胶渗透色谱能分离的物质的分子量从500-几百万,但是具体要根基色谱柱的分离能力来定,另外,凝胶色谱只是对样品进行粗分,最终得到的也是相对分子量(与用标样建立的曲线得出),若是相差几百的分子量一般分不开。
    凝胶色谱的标准曲线是出峰时间与分子量建立的曲线,由样品的出峰时间确定其分子量,其分子量与实际的分子量是有偏差的,只能用做参考;因为标样的结构与样品结构存在一定偏差,最终得到的分子量也是相对的。
   
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