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共有 15 人回复了该问答超微量紫外分光光度及吸光度不准确如何处理?
 回复kingandqueen108发表于:2020/9/4 13:46:33悬赏金额:13积分 状态:未解决
各位好!有个问题想请教大家:
具体情况如下:
配制60mg/L 重铬酸钾溶液,用岛津UV2450(普通紫外分光光度计)测量235nm、257nm、313nm、350nm出的吸光值,然后计算吸光系数,结果符合药典要求。
现在有一台超微量紫外分光光度计,加样量2ul左右,测试的吸光度比岛津偏低,计算出来的吸光系数自然就比药典要求低!
现在有问题:
1、超微量紫外分光光度计是否能够用重铬酸钾溶液衡量吸光准确度?
2、是所有的紫外分光光度计(无论普通还是微量),只要在量程范围内,测试同一物质吸光度是否都要一致?
个人理解是需要保持一致!
3、超微量紫外分光光度计通常用于核酸和蛋白浓度测量,如果重铬酸钾吸光系数不准确,是否影响核酸和蛋白的测量结果?
4、如何评价超微量紫外分光光度计的性能?
5、测量蛋白溶液的浓度CV很好,但是测量重铬酸钾的吸光值总在变化(不同时间测试变化较大,偏差可大于5%),又是什么原因?
虽然对于上面的问题,我认为只要是紫外分光光度计,原理一致,那么在量程内就应该保证结果一致!
现在想听听大家的意见和看法!
 回复  1# chenjinghp  回复于:2020-09-04 14:53:33
一、分光光度计有国家标准管控,既计量器具许可证制度,所以有统一的手段和标准来验证和评价仪器。据我所知,目前市面上的超微量紫外分光光度计都没有计量许可证的,所以仪器的好坏无从评价。
二、光度计的检验都是在10mm光程下进行的,超微量紫外分光光度计的光程一般为1mm或更低,显示的吸光度是靠数据换算成10mm光程下的读数,所以准确度肯定不如普通光度计。
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