回复v3037031发表于:2020/9/18 16:30:53悬赏金额:
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未解决
我要检测蜂蜜中的低聚糖主要包括二糖和三糖,想用HMDS衍生。
按照文献中的方法,标样溶解在80%乙醇中,氮吹干后,在55℃烘箱烘干30分钟,先加入200 uL 2.5%盐酸羟胺(溶于吡啶),此时溶液是澄清的,在75℃反应30min,然后加入200 uL HMDS+TMS_PYRIDINE(3:1:9)衍生剂, 问题出现了,一加入衍生剂溶液就变白变浑浊,后来还产生了沉淀也是白色的。没有理会,继续45℃反应30min。想过膜进样。发现浑浊的反应液过膜后颜色还是发白看起来也是浑浊的。根本没法进样。
后来我吸了点HMDS+TMS_PYRIDINE(3:1:9)衍生剂到空离心管中,发现衍生剂也不是很澄清,看着有点发白浑浊的样子。是衍生剂失效了吗?
我分析可能出现问题的点:
(1)样品没有完全干燥,反应体系中有水,所以水和吡啶反应使溶液发白。
(2)购买的盐酸羟胺和吡啶都是分析纯的,是不是试剂纯度不够,所以后来加入衍生剂后和杂质反应。。。(猜想)
(3)就是购买的衍生剂有问题了,过期了。但是衍生剂是那种购买来就预混好的分装在1mL小管里的,平时都保存在4度冰箱。
希望论坛里各位大牛们帮忙分析下问题出在哪里,在此先谢过啦