回复dywzqbx发表于:2020/9/14 22:44:59悬赏金额:
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未解决
某Sample的含量测定,样品浓度:0.2873mg/ml 色谱条件
(1)色谱柱phenomenex Gemini C18 150mm,4.6×5um,流动相0.1%TEA-ACN=45:55 pH11.34,流速1.5 ml/min。检测器:RI 50℃。柱温:50℃
分析结果如下:连续5针峰面积为789870、787904、786065、793690、782278.RSD=0.54%
(2)色谱柱Agilent zorbax SB-C18, 5um×150mm×4.6mm ,流动相pH2.5 NH4H2PO4 buffer:acetonitrile 55:45 ;Buffer:4.6g NH4H2PO4+ 1L H2O ,流速1.5 ml/min。检测器:RI 50℃。柱温:50℃
分析结果如下:连续5针峰面积为1230235、1231314、1231415、1232304、1232974.RSD=0.08%
这两个条件是前后连续两天完成,后面第二个条件为第二天做的,样品性质稳定,不存在降解,样品由API配制,只有一个成分,不存在成分干扰问题。很明显,两个色谱条件下的峰面积有着显著不同。
此外,实验室另一人员在用UV 280nm测定含量时,在流速、流动相比例、pH不同的情况下得到的峰面积都具有显著地差异。
我原本的观念:在进样前系统已经由流动相平衡,所以流动相中的影响应该是已经扣除了,色谱峰信号应该只与由色谱柱中流出的分析成分有关,而折光系数及紫外吸收都是物质的固有性质,应该是个定值,现在却随色谱条件的变化发生变化,现在想知道同一样品,可能会影响峰面积的因素及影响趋势,最好有机理解释。