回复dywzqbx发表于：2020/9/14 22:44:59悬赏金额：
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未解决
某Sample的含量测定，样品浓度：0.2873mg/ml 色谱条件
（1）色谱柱phenomenex Gemini C18 150mm，4.6×5um，流动相0.1%TEA-ACN=45:55 pH11.34，流速1.5 ml/min。检测器：RI 50℃。柱温：50℃
分析结果如下：连续5针峰面积为789870、787904、786065、793690、782278.RSD=0.54%
（2）色谱柱Agilent zorbax SB-C18, 5um×150mm×4.6mm ，流动相pH2.5 NH4H2PO4 buffer:acetonitrile 55:45 ；Buffer：4.6g NH4H2PO4+ 1L H2O ，流速1.5 ml/min。检测器：RI 50℃。柱温：50℃
分析结果如下：连续5针峰面积为1230235、1231314、1231415、1232304、1232974.RSD=0.08%
这两个条件是前后连续两天完成，后面第二个条件为第二天做的，样品性质稳定，不存在降解，样品由API配制，只有一个成分，不存在成分干扰问题。很明显，两个色谱条件下的峰面积有着显著不同。
此外，实验室另一人员在用UV 280nm测定含量时，在流速、流动相比例、pH不同的情况下得到的峰面积都具有显著地差异。
我原本的观念：在进样前系统已经由流动相平衡，所以流动相中的影响应该是已经扣除了，色谱峰信号应该只与由色谱柱中流出的分析成分有关，而折光系数及紫外吸收都是物质的固有性质，应该是个定值，现在却随色谱条件的变化发生变化，现在想知道同一样品，可能会影响峰面积的因素及影响趋势，最好有机理解释。
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