动物源性食品中四环素、沙星类
残留量的快速测定方法
范围
本方法规定了动物源性食品中四环素类、沙星类高效液相色谱的快速测定方法。
本方法适用于动物源性食品中四环素类、沙星类高效液相色谱的快速测定。
2.1
原理
试样中的残留物经四环素类、沙星类快速检测前处理试剂盒处理，样液经四环素类专用层析柱净化、浓缩用高效液相色谱检测，外标法定量。
2.2
试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。
2.2.1乙腈：色谱纯。
2.2.2
甲醇：色谱纯。
2.2.3
三乙胺（分析纯）
2.2.4
磷酸（85%）（分析纯）
2.2.5
标准品: 土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星纯度大于98 %。
2.2.6
标准贮备溶液:分别称取土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星各10mg，用甲醇溶解并定溶于100 mL棕色容量瓶中，配制成100 µg/mL的标准贮备液，置于-20℃保存，有效期三个月。
2.2.7
混合标准工作溶液:用流动相稀释标准贮备溶液，配制成土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星均为10 µg/mL的混合标准溶液。0～4℃避光保存。
2.2.
四环素、沙星类快速检测前处理试剂盒*。
2.3
仪器和设备
2.3.1
高效液相色谱仪：配紫外-可见光波长检测器。
2.3.2
匀浆机。
2.3.3
固相萃取机
2.3.4
离心机：4000 r/min。
2.3.5
调速多用振荡器。
2.3.6
聚四氟乙烯离心管: 2.5 mL，50 mL，具塞。
2.4
样品制备
准确称取已捣碎的样品5.00 g于50 mL离心管中,先加入四环素、沙星类快速检测前处理试剂盒中的提取剂 (液体20mL)，用调速多用振荡器150 rpm振荡3 min,，4000 r/min离心5 min，收集上清液10mL加入四环素专用层析柱中(使用前依次用5mL甲醇、5mL提取剂、5mL水激活)挤干，用2mL提取剂洗涤，用0.80mL甲醇洗脱,收集洗脱液,用0.2mL流动相定容至1.0mL。供仪器测定。
2.5 测定
2.5.1  液相色谱条件
a) 色谱柱:
C18柱，250 mm×4 mm(i.d.),粒度5µm;
b) 流动相:
0.05 mol/L磷酸/三乙胺缓冲液（pH2.4）+乙腈(80+20,V/V);
c) 流速:
1.0mL/min;
d) 柱温:
室温;
e) 检测波长: 四环素类紫外检测器350 nm。沙星类 紫外检测器310nm；荧光检测器激发波长280nm，发射波长450nm。
f) 进样量：50 uL。
3.5.2  标准工作曲线绘制
移取各移取四环素类、沙星类混和标准液，用流动相稀释成20 ng/mL、50 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL标准工作溶液。按液相色谱条件（3.5.1）进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线，标准工作曲线范围：20.0~500 ng/mL。
3.5.3 试样测定
  用微量进样器准确吸取试样溶液（3.4），按液相色谱条件（3.5.1）进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积。
3.6
结果计算
按式（1）分别计算供试样品中的四环素类、沙星类残留量。


2×ci×V
ω=
　…… (1)
m
ω－水产品中四环素、沙星类残留量，μg/kg；
ci －标准曲线上查出试样溶液中四环素、沙星类标准工作溶液的浓度，（μg/L）；
V－最终定容体积数，mL；
2－换算常数；
m－供试试料样品重量，g。
本方法分别计算四环素类、沙星类结果。
3.7
检测限
本方法土霉素、四环素检测限为20µg/kg；金霉素、强力霉素的检测限为50µg/kg，沙星类为：5µg/kg
3.8
回收率


本方法土霉素、四环素、金霉素、强力霉素回收率为:75%～85%；沙星类回收率为：75%～85%

《水环境中四环素类污染物检测方法及人体中多溴联苯醚机体负荷研究》，此论文有80页之多，我积分不够，你可以打开来截图存档：http://www.doc88.com/p-0893982475468.html！

高效液相色谱法测定环境水样中5种四环素类抗生素残留.pdf