回复v2685866发表于：2014/5/26 15:15:41悬赏金额：
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帮朋友问：有人做过猪肉组织中瘦肉精（沙丁胺醇、克伦特罗）的提取方法吗？现在的问题是提取效率偏低，求高人指点！
提取步骤
称取5g已捣碎的样品于50ml离心管中，加入8ml乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加50µLβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶，混匀后，37度环境下酶解12h。添加100µL的10ng/mL内标工作液于待测样品中， 加盖置于水平振荡器上振荡15min，离心10min(5000r/min )，取4mL上清液加高氯酸调节pH值到1土0.3。5000r/min离心10min后，将全部上清夜转移到50ml的离心管中，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11。加入10mL饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇-乙酸乙酯(6+4)混合溶液，充分提取，在5000r/min下离心10min。转移全部有机相,在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液,超声混匀,使残渣充分溶解后备用。将阳离子交换固相萃取小柱连接到真空过柱装置，然后将上述残渣溶液上柱，依次用5mL水、5mL的2%甲酸水溶液和5mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干，最后用5mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入1ml的0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95/5)，超声混匀。用0.22微孔滤膜过滤，上
LC-MS/MS进行分析。
SPE净化步骤净化
SPE柱：Welchrom® P-SCX，60mg/3mL
a 活化：依次加入5mL 甲醇和5mL水，流出液弃去；
b 上样：将提取液加入Welchrom® P-SCX柱中，流出液弃去；
c 淋洗：依次用5mL水，5mL 2%甲酸水溶液和5mL甲醇淋洗，淋洗液弃去；
d 洗脱：6mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；
e 重新溶解：50ºC下氮气吹干洗脱液，准确定容至1mL后用
LC-MS/MS进行分析。
nphfm2009 回复于：2014/6/4 7:02:03
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