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共有 27 人回复了该问答HPLC分析叶酸精密度和线性都比较差。
 回复lifesinger发表于:2020/5/11 15:09:25悬赏金额:3积分 状态:未解决
叶酸是溶解于水中,用氨水调PH到9~10之间,再用含少量乙腈的水稀释定容的。
流动相就是普通的水和甲醇、离子对试剂,调PH至酸性。
峰型还好,但精密度很差,线性一般只有0.99*,有时候是0.999,但液相做到4个9我觉得才是正常的。3个9误差太大了。

后来改用水稀释定容试了一下,结果更差。1微克/毫升的出峰比2微克/毫升的小得太多,3微克/毫升比2微克/毫升峰还略小。
 回复  1# zhoujin83  回复于:2020-05-11 19:43:25
试问,加离子对试剂是为了什么,怎样才能实现离子对试剂的作用?以下说说我的理解,因为我用离子对做酸性物质少,不一定对,但楼主不妨参考一下。
对于碱性物质来说,因为保留很弱,即使提高了流动相的pH,也不一定能有多大的保留。这种情况下,就可能需要使用离子对试剂;并且,为了使离子对试剂发挥作用,一般将流动相pH调至酸性,为的就是使碱性物质全部电离,以便于离子对试剂中的带电基团结合,减小极性以增强保留。
对于酸性物质来说,需要使用离子对试剂的情况下,基本上化合物的pKa很小。在这种情况下,流动相pH可能需要近中性才好。所以,不知道楼主流动相的pH是多少,可否试试其他pH。
还有,楼主的流动相如果只添加了离子对试剂的话,是不合适的,最好还能加上其他缓冲盐,否则光离子对是没有缓冲能力的,很容易因为样品带有酸碱性影响流动相pH而使方法不耐用。
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