前提是我懂紫外分光光度法，不懂树脂的替代度是怎么回事，至少现在还是模糊的。

树脂是用来固相合成多肽用的，替代度可能是上面有多少个反应点？

我们这用一种叫“王树脂”的东西。检测步骤是：

1、首先将一种叫“Fmoc-Leu-OH”的氨基酸接到树脂上，用到好多试剂。

（1）称取1g树脂，用4ml左右的DMF使其膨胀，约放置30分钟时间；

（2）加入计算当量的Fmoc-Leu-OH、HOBt-Cl、DIC、DMAP，室温振荡15小时以上，（溶液是浅棕红色）。

（3）分别用DMF3*10ml、MeOH3*10ml、DCM5*10ml冲洗。洗后树脂在室温下减压干燥4小时以上。

2、用Fmoc-Leu-OH为对照，称取10mg左右，用20%哌啶的DMF溶液溶解，定容于10ml量瓶中；平行将干燥后的树脂称取3份，0.1g左右，同样用20%哌啶的DMF溶液溶解，定容于10ml量瓶中。以上4瓶超声30分钟。

3、放置，使树脂沉降，（Fmoc-Leu-OH已经溶解），取比色皿加入2.7ml甲醇作为空白，以对照溶液50ul、70ul、90ul、110ul、130ul分别加入到比色皿中，在300nm下测吸光度，制定测量曲线。

3.*特别说明：我第一次做，在测对照溶液时，是平行取2皿，各加2.7ml甲醇，1作为空白，另一分别加50ul，后各加20ul连续测吸光度。

4、同样以2.7ml甲醇为空白，测样品溶液的吸光度。

我的问题是：

1、为什么单以甲醇为空白，溶液中也含有哌啶和DMF，这2者没有紫外吸收吗？

2、溶液与甲醇的混合，是用枪头管不断吸排混匀的，以前没有这样做过，生化实验可能这样做的比较多？

3、对照溶液各溶液体积不一样，虽然差异不大，并且R值也在4个9以上，但这样做是否合适？

4、对照只做1份，可以吗？

5、为什么用Fmoc-Leu-OH，其他的Fmoc氨基酸不行吗？

6、最重要的问题，反应原理是什么？为什么选300nm？步骤1中（2）下各种试剂的作用是什么？用三种溶剂去洗，洗什么？

整体糊涂中，求帮助！！！谢谢了！