回复v2715317发表于:2013/4/22 20:53:46悬赏金额:
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已解决
最近在做随机引物PCR产物的分离,用文献中的条件先分离DNA marker,分离marker时可以分离出想要的峰(峰有些宽),怎样可以改变峰型?在分离PCR产物时,虽有峰出现却和跑琼脂糖凝胶电泳时跑出的条带对应不上,找不到原因, 特来求助各位
换缓冲液体系和管子应该可以改变峰形,在可以的条件下可以增加电压;
CE和琼脂糖凝胶应该是不一样的吧?
原文由 我是向日葵(v2715317) 发表: 改变缓冲液的浓度可以吗? 管子已经换过了,没什么改变。跑样电压还真没改过,明天试一试。 如果跑琼脂糖凝胶,我要的片段在300bp ,那跑CE的时候我要的片段应该和marker 300bp的片段在同一时间出峰 不是吗? 我做毛细管的时间不长,所以不大懂。 |
即使是重复别人的实验,有时也需要对别人的条件进行优化的,不一定是照搬过来就可以用
没做过BGE。不过用这种模式分离前的毛细管是不是先要处理一下?比如毛细管内壁要先涂层以消除电渗流的影响同时防止吸附。涂层搞得好的话可能峰宽问题就可以解决了。