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共有 1 人回复了该问答固相萃取前体积及固相萃取问题!
 回复penglin1984发表于:2020/3/5 9:40:48悬赏金额:15积分 状态:未解决
1、体积问题

2g空白组织+100uL标准品溶液(40ug/mL),加10mL磷酸盐缓冲液提取,离心后取上清。离心后的残渣再加入10mL磷酸缓冲液提取,离心后取上清。合并两次上清液。

现在要弄明白的问题是:这个合并后的上清液中药物的理论浓度应该是多少?

2、回收率低的问题

如果合并后的上清液体积按20mL计算,理论药物浓度为4ug/20mL,即为0.2ug/mL。按这个浓度计算回收率,上清液不过固相萃取柱时的回收率为85%以上。过完固相萃取柱以后,回收率只有40%。这是什么原因呢?固相萃取柱的问题?

我用标准品溶液过固相萃取柱考察过回收率的情况,结果按照正常活化---平衡---上样---淋洗---洗脱程序,回收率大于80%

考察过不同品牌的固相萃取柱,国产艾杰尔和岛津的C18柱,回收率都不理想。有人建议换更大容量的小柱。更换容量对于回收率改善有没有用?如果没有改善,那有什么更好的建议么?
 回复  1# ff2012  回复于:2020-03-12 16:27:48
如果暂时不想换大规格的柱子试验,可以对上样流出液,淋洗液分别进行检测,如果上样流出液中有目标物,那么有俩种可能,1是柱子规格过小,导致样品穿透,2是柱子对目标物的保留不好,如上样流出液没有目标物,说明柱子对目标物保留很好,也不需要换大规格的柱子,再看淋洗时候的流出液,若此时有流出,可以考虑换下淋洗液,如也没有,那就是柱子本身对目标物吸附力较大,应该换下洗脱液。
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