回复yoclzz发表于:2012/5/12 21:51:21悬赏金额:
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未解决
我是想做一个硅胶层析柱分离净化的加标回收实验,要看洗脱剂对样品回收的影响,分析物是弱极性的 。
(一)我的样品的标准溶液是用甲醇配的,20ppb。我的样品处理后是Hex作为溶剂的,所以我取了0.5ml的标准液于塑料试管,然后我用氮吹吹干,之后加1mlHex复溶,用涡旋混匀器涡旋1min混均,放在旁边待用。
(二 )硅胶层析柱自填:(1)硅胶失活(之前做好的):10g硅胶加入0.5g蒸馏水于研钵中混均,密封过夜使用。
(2)称取4g5%水的硅胶加入到15mlHex的小烧杯中,玻璃棒搅拌均匀。然后湿法装柱的,装柱前柱子加了10mlHex,自由沉降后加1cm无水硫酸钠然后用双链球压实,上样前多跑了两个个柱体积的Hex,等到快到无水硫酸钠层时上样,然后用DCM洗脱。
(三)收集好洗脱液后旋蒸近干,然后转移到一次性试管,氮吹干,之后加入0.5ml甲醇复溶,涡旋混匀器涡旋1min混均,转移到进样品,然后液质检测。
出现问题:(1)硅胶柱洗脱时跑着跑着就开裂了,感觉对回收率是不是有影响呢?
(2)上样时,我用的是一次性吸管上样的,但是每次都把无水硫酸钠冲成了斜面,不知道这对回收率会不会有影响呢?
(3)做了好几次回收率不是很高就是基本回收不回来,很不稳定,不知道哪出来问题,我在想是不是硅胶失活那步混合不均匀呢?大家知不知道硅胶失活这步的具体方法呢,我是自己摸索的。
问题比较多,希望有人能帮帮忙解决下。