水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物的快速测定方法

高效液相色谱法      依据标准（SN/T1768-2006）

样品前处理

⒈ 准确称取已捣碎的样品5.00 g于50 mL离心管中，先加入提取剂1 (液体20.0 mL)，用匀浆机以8 000 r/min的速度均质30 s。

⒉ 再加入提取剂2(固体粉末), 振荡1 min，4 000 r/min离心5 min。取上清液5mL于50mL试管中，加入10～15mL水混匀，备用。

SPE净化

活化 2ml乙腈：冰乙酸（98/2，V/V）、5ml甲醇：冰乙酸（80/20，V/V）、5ml蒸馏水激活

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上样 正压或负压以2～3mL/min速度过柱

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淋洗 5mL乙腈：水（20/80，V/V），挤干

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洗脱 0.80mL乙腈：冰乙酸（98/2，V/V）洗脱，接收

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用乙酸钠缓冲液定容至1.0mL，过微孔滤膜

液相色谱条件

a) 色谱柱： C18柱，250 mm×4.6 mm(i.d.)，5µm；

b) 流动相：乙腈+乙酸盐缓冲液(80/20，V/V)；

c) 流速：1.0 mL/min；

d) 柱温：室温；

e) 检测波长时间程序： 0 min～5.0 min，618 nm； 5.0 min～12 min，588 nm；12 min～18 min，267 nm；

是按照上面说的做的吗？