回复jervis36发表于:2006/3/31 21:52:00悬赏金额:
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已解决
我是个液相的新手,接触不到半年,以前是学习临床的,因为工作的原因,所以现在改作液相,这两天在作血清的时候遇到了好大的麻烦,就是需要测定的成分(水溶性的)的保留时间点上始终有个特别大的蛋白质,改了好多次的流动相及血清都经过几个预处理,那些个讨厌的家伙始终如一的在那儿(保留时间随着流动相改变而变,始终在我需要测定的成分周围出现,而且峰面积特别的大,还有其他的地方也有好多的蛋白质峰,每次进样前我都用0.2微米的一次性过滤器过滤后再进的样,流动相是甲醇/甲醇(10%):乙酸(0.5%)水溶液(89.5%)=0-25/100-75(梯度在30min变化,梯度曲线为6,柱子为迪马公司的C18 150*4.6钻石柱子)监测器为waters 2996 进样器为waters 2995 我的邮箱是jervis36@163.com或者电话028--89192580,QQ250116810谢谢各位高手了啊!!!
原文由 who1235 发表: 比较彻底的是使用超高速离心机,直接祛除蛋白质。 |
同意这种说法,离心也是去除蛋白质的一种好方法。
第一,你说的杂质峰可能是色谱条件的问题,如果不走梯度的话试试。还有干扰的话,你就试试SPE柱。如果还有干扰,就不是蛋白的原因,你就采取反提的办法。这个干扰峰有可能是内源性杂质而非蛋白。
mhp77 回复于:2006/4/6 16:28:00
我也觉得不一定是蛋白的事。
mhsr 回复于:2006/4/4 9:22:00
离心机的转数高一些试试,14000rpm怎么样