本人是液相新手，最近用了一个phenomenex  Hydro-RP的色谱柱， 规格是150*4.6*4.
因为项目很着急，所以仓促之间定的色谱条件有点苛刻，最后用的是25%的乙腈，2.0ml/min 的流速，液相色谱仪是Waters。刚开始用的时候。压力是2400左右， 每次使用的流动相都用0.22微米的膜过滤，因为是原料药，所以样品没有过滤。用完都用50%的乙腈冲洗半小时。再用100%的乙腈冲洗1小时，但是用了几天后发现压力逐步上升。使用过程中压力很稳定，但下次再使用时就发现压力上升个100~200的样子（每次用都这样上升，现在已经是3400了，仪器的压力上限是4000，所以现在又点寝食难安的感觉！！！）。感觉是色谱柱被杂质堵塞了，所以用10%~100%的乙腈梯度洗脱4小时，压力始终没有下降。后来用异丙醇0.2的流速冲洗2小时后，换100%的乙腈0.5流速冲洗4小时，压力依然没有下降。不知道是不是色谱柱在较大的压力下塌陷了， 但是前后做出来的色谱图比较，理论板数和分离度以及出峰时间都没有什么大的改变！ 本人新手，望指点！