回复zxpshujie发表于:2011/5/23 13:02:20悬赏金额:
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最近开始做毛细管电泳研究药物与蛋白质的相互作用,贝克曼电泳仪,紫外检测器,发现人血清白蛋白和中性物质DMF以及甲醇的出峰时间相差不多,0.2M,0.02M,0.05M的磷酸缓冲液都试了(pH=7.4和7.8),峰还是分不开,而且中性物质DMF和甲醇都出倒峰。这些现象的出现到底是什么原因引起的呢?是管内没有电渗流吗?怎么检测电渗流呢?非常感谢各位有经验的大侠给予指导。谢谢。
很显然,你的毛细管是有电渗流的,否则甲醇和DMF这类中性物不会出峰,甲醇出倒峰很正常,本来就应该出倒峰的,吸收比buffer还弱。
你用甲醇和DMF的目的是什么?是电渗流标记?那就用DMF一个就够了。
你白蛋白的浓度多少?不要太高,太高的话,电流会很不稳定,毛细管也很容易脏。
每次样品进完了,都用NaOH清洗毛细管。
用来检测电渗流的甲醇的峰就是倒峰。
没有分开,那么就改变缓冲液,比如pH值、浓度、组成等。
用毛细管电泳可以检测HSA与药物的相互作用的,以前有人做过,可以看看文献。