方法名称：
     北草乌--生物碱含量测定--HPLC法
应用范围：
     确定其主要生物碱含量，以供用药参考
方法原理：
     北草乌根粉分别以不同溶剂，采用不同提取方法进行提取，提取液经液相色谱分离，在235nm处测定峰面积，外标法计算含量。
仪器设备及实验条件：
    

仪器设备  日本岛津公司LC-10A 液相色谱仪带SPD-M10A 二极管阵列紫外检测器和CLASS-LC10 工作站；ZFQ-5旋转蒸发仪（天津玻璃仪器厂)；8893E-MT 超声波清洗器（美国Coli-Parmer)

色谱条件  ODS柱（25mm×4.6mm)，流动相：甲醇-水-乙腈（67：33：2)，内含6mmol/lSDS，0.02mol/lNaH2PO4)，流速：1.0ml/min，检测波长:235 nm
试样制备：
    

对照品溶液的配制  准确称取新乌头碱3.0mg，次乌头碱2.7mg，乌头碱2.4mg，用流动相溶液溶解后并移至100ml容量瓶中稀释至刻度，摇匀，即得.

供试品溶液的配制  分别取8份过6 目标准筛的北草乌根粉各200g盛于2500ml的细口瓶中，四份用于溶剂浸提，4份用于溶剂超声辅助浸提。分别加10%氨水300ml，放置2h充分浸润，然后分别两两加入1000ml苯、氯仿、乙醇、乙醚作为浸提溶剂，溶剂浸提时间为12h，每隔1h用力振摇，使分散均匀，当进行6h后，倾出溶剂，重新补加1000ml溶剂；超声辅助浸提两次，每次各 1h，并不时用力振摇，当进行1h后，倾出溶剂，补加另1000 ml 溶剂，继续超声辅助浸提，浸提结束后，过滤，于旋转蒸发器上将溶液浓缩，回收溶剂，用2%的盐酸萃取4次，合并萃取液，加浓氨水调pH值至9，产生白色絮状沉淀，静止过滤后，干燥恒重得乌头生物碱.。取总乌头碱10.8mg，用流动相溶液溶解后并移至100ml容量瓶中稀释至刻度，摇匀，即得。
操作步骤：
     分别精密吸取试品溶液10μl，按上述色谱条件测定，外标定量法计算样品中北草乌生物碱的含量。

好柱子多了，看你自己方法用哪种，你们没有旧柱子吗，可以先试试。我液相只用W的，从symmetry到Xterra到Xbridge,相当好，特别粒度5u的，柱压低，柱效也高

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月旭版面的链接：http://bbs.instrument.com.cn/forum_595.htm